[发明专利]一种V型叶片苦荞种质的创制及其初步定位

说明书

本发明公开了一种V型叶片苦荞种质的创制并对V型叶片基因进行了初步定位。本发明所采用的技术方案为：V型叶片效苦荞种质的创制方法，包括以下步骤：刺荞经EMS诱变，获得V型叶片，叶色为深绿色的突变体HPE,以突变体HPE的M5代作为父本，选择优良苦荞品种作为母本，经过杂交，得到综合性状优良的V型叶片苦荞株系。本发明还提供了一种V型叶片刺荞突变体HPE基因初步定位方法。本发明有针对性的创制叶片表现为V型叶片，叶色为深绿色单株，获得V型叶片苦荞新材料，后代材料已基本稳定，可直接在生产上利用。同时对刺荞突变体HPE基因进行了初步定位，可以将该定位基因作为所属染色体或其一部分的标记。

技术领域

本发明属于一种获得V型叶片苦荞种质的创制及其初步定位，属于作物遗传育种领域。

背景技术

苦荞(Fagopyrumtataricum)是蓼科(Polygnaceae)荞麦属(Fagopyrum)的两个栽培种之一。苦荞富含黄酮、蛋白质、粗纤维、维生素、矿物元素等营养成分，具有很高的营养价值和保健功能，然而苦荞产量低而不稳，品种退化严重，更新速度慢，品种间品质参差不齐，严重阻碍了苦荞的生产及发展。利用甲基磺酸乙酯(EMS)构建饱和突变体库是进行功能基因组研究的重要途径，同时也是进行资源创新和育种的一种行之有效的方法。EMS诱变具有操作简便、容易形成点突变、突变频率高、染色体畸变少、易于筛选等多重优点，是目前应用最广泛的方法之一。目前，在拟南芥、水稻、小麦、玉米、大豆、大麦、油菜等作物中已经利用EMS诱变技术构建了突变体库。苦荞由于花小，为自花授粉作物，常常闭花授粉，非常不便于进行人工去雄和有性杂交工作，苦荞品种间杂交工作很难开展。目前还没有EMS诱变获得V型叶片苦荞种质的方法。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种利用诱变、人工杂交的方法获得V型叶片苦荞种质的方法，并通过重测序的方法对叶片表现为V型叶片，叶色为深绿色刺荞突变体HPE基因进行了初步定位。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为一种V型叶片苦荞种质的创制方法，按照以下步骤进行操作：

(1)EMS诱变，步骤如下：

A.精选刺荞种子，放入锥形瓶中，加入适量0.1％Tween-20，没过种子，在通风橱内摇床上室温处理12h，此后所有步骤均在通风橱内操作；

B.倒掉Tween-20溶液，加入双蒸水清洗种子3-4遍；

C.沥干水分，向瓶中加入体积比为0.3％-0.4％的EMS溶液，震荡处理12h；(EMS溶液指的是甲基磺酸乙酯溶液，以下相同)

D.将EMS溶液倒入含有7.5倍体积0.5MNaOH溶液的容器内；(0.5MNaOH溶液指的是0.5mol/L的NaOH溶液，以下相同)

E.加适量水，快速漂洗一次，之后再加适量水，充分漂洗种子数次，至种子无气味为止，废液全部倒入0.5MNaOH溶液的容器内；

F.漂洗完后的种子，平铺于滤纸上阴干，将阴干的种子种植于大田，将处理好的种子播种于事先中耕过的土地,播种当代统计致死率达30-50％,则诱变有效；

G.单株收获M1代突变体,收获潜在可利用突变体；

H.M2代筛选遗传变异的材料，发现叶片表现为V型叶片，叶色为深绿色的突变体，

I.M2-M5代连续种植，获得稳定表达的株系,

(2)杂交,步骤如下：

A.亲本选择：大田栽培苦荞各品种，父本母本比邻种植，选择优良苦荞品种作为母本，选择M5代叶片表现为V型叶片，叶色为深绿色的突变体HPE作为父本；B.去雄：在苦荞材料进入初花期后，仔细观察雄蕊花药，若8个雄蕊均为花药饱满，颜色粉红，表面光滑，则确定为未散粉的花朵，用尖锐的镊子小心地拨离花药，去雄干净后，用红线系在花柄上以作标记，挂上标签牌，写上杂交母本名称、去雄人姓名、去雄时间，标签牌挂在靠近去雄花朵的位置上，并去除该花朵周边的所有花朵；