[发明专利]三聚体化新冠病毒受体结合域、其制备方法与应用

说明书

本发明涉及生物医学领域，特别涉及三聚体化新冠病毒受体结合域、其制备方法与应用。本发明构建了并表达了三聚体化新冠病毒RBD。本发明将目的片段连接至pFastBac1载体，转化到DH10Bac感受态细胞后获得重组杆粒。将重组杆粒转染至sf9细胞后进行病毒拯救，获得重组杆状病毒，将重组杆状病毒接种悬浮sf9细胞96小时后收获培养基进行纯化。PCR及WesternBlot结果显示，重组杆状病毒构建成功，并可以成功表达外源蛋白RBD‑6HB。对纯化后的蛋白进行SDS‑PAGE及WesternBlot鉴定，结果显示，纯化效果良好，为后期的疫苗及基础研究奠定了基础。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，特别涉及三聚体化新冠病毒受体结合域、其制备方法与应用。

背景技术

当前，新型冠状病毒在全球范围内仍呈现蔓延之势。新型冠状病毒(SARS-CoV-2)属于冠状病毒科β冠状病毒属，共分为四个结构蛋白(S、M、E、N)，其中S蛋白与病毒吸附入侵以及诱导特异性抗体、中和抗体的产生有关。S蛋白分为S1和S2两部分，S1与受体结合有关，S2与膜融合相关，与受体结合的部位受体结合域(ReceptorBinding Domain，RBD)位于S1的C端，天然状态下，S1蛋白呈现三聚体结构。

因此，模拟新型冠状病毒(SARS-CoV-2)受体结合域(RBD)的天然结构，对后期获得疫苗及基础研究具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了三聚体化新冠病毒受体结合域、其制备方法与应用。PCR及WesternBlot结果显示，重组杆状病毒构建成功，并可以成功表达外源蛋白RBD-6HB。对纯化后的蛋白进行SDS-PAGE及Western Blot鉴定，结果显示，纯化效果良好，为后期的疫苗及基础研究奠定了基础。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了三聚体化新冠病毒受体结合域，在新型冠状病毒受体结合域的C端添加人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)gp41蛋白，获得目的片段，连接至载体，转化感受态细胞获得重组杆粒，转染至细胞收获重组杆状病毒，再接种细胞后培养，收集培养基、纯化获得所述三聚体化新冠病毒受体结合域。

在本发明的一些具体实施方案中，所述载体为pFastBac1载体；所述感受态细胞为DH10Bac感受态细胞；所述细胞为sf9细胞。

本发明还提供了所述的三聚体化新冠病毒受体结合域的制备方法，在新型冠状病毒受体结合域的C端添加人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)gp41蛋白，获得目的片段，连接至载体，转化细胞获得重组杆粒，转染至细胞收获重组杆状病毒，再接种细胞后培养，收集培养基、纯化获得所述三聚体化新冠病毒受体结合域。

在本发明的一些具体实施方案中，所述载体为pFastBac1载体；所述感受态细胞为DH10Bac感受态细胞；所述细胞为sf9细胞。

具体的，在新型冠状病毒受体结合域RBD的C端添加一段人免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus，HIV)gp41蛋白，使RBD形成三聚体结构，以模拟其天然结构。杆状病毒表达系统属于真核表达系统，具有安全、高效的优点，其表达的蛋白更加接近天然结构。本发明将目的片段连接至pFastBac1载体，经转化至DH10Bac感受态细胞获得重组杆粒，转染至sf9细胞后收获重组杆状病毒，再将重组杆状病毒接种sf9细胞后96h收获培养基，纯化，获得目的蛋白，即为三聚体化新冠病毒受体结合域。

本发明还提供了所述的三聚体化新型冠状病毒受体结合域或所述制备方法制得的三聚体化新型冠状病毒受体结合域在制备疫苗或新型冠状病毒研究中的应用。