[发明专利]一种基于ELP-Intein和ccdB的高效质粒载体及其使用方法在审
| 申请号： | 202110185156.1 | 申请日： | 2021-02-10 |
| 公开（公告）号： | CN112852856A | 公开（公告）日： | 2021-05-28 |
| 发明（设计）人： | 安迎锋;高何瑞;高嵩;王虹玲;张艺峰;许淑敏;邵一伦;杨尧;王潘;汤静怡;李少荣 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/65;C07K1/14;C07K1/22 |
| 代理公司： | 北京化育知识产权代理有限公司 11833 | 代理人： | 尹均利 |
| 地址： | 110161 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 elp intein ccdb 高效 质粒 载体 及其 使用方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种基于ELP-Intein和ccdB的高效质粒载体，其特征在于：含有ccdB编码蛋白和多样化设计的多克隆位点，能够实现无背景粘性末端克隆、平末端克隆，并可以通过酶切方法自制T载体实现TA克隆；
2.按权利要求1所述的一种基于ELP-Intein和ccdB的高效质粒载体，其特征在于：含有基于内含肽Intein自我切割的ELP蛋白和His-tag标签，通过可逆循环相变(ITC)及镍离子亲和层析实现便捷高效的蛋白纯化。这一纯化策略无需要使用咪唑，避免了咪唑对某些蛋白的抑制作用；同时也克服了经典ELP纯化步骤中需要透析除盐的步骤。
3.按权利要求1所述的一种基于ELP-Intein和ccdB的高效质粒载体相关的使用方法，其特征在于：表达的蛋白在纯化过程中不需要额外的蛋白酶处理步骤，用于去除蛋白标签。
4.按权利要求1所述的一种基于ELP-Intein和ccdB的高效质粒载体相关的使用方法，其特征在于：在细胞裂解液中加入高浓度尿素，从而将后续的基于ELP标签的纯化步骤与尿素的变性-复性循环有机地结合，从而有效的实现不溶性蛋白包涵体的复性和纯化。
5.按权利要求1所述的一种基于ELP-Intein和ccdB的高效质粒载体，具有SEQ ID No:1中所示的碱基序列。
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