[发明专利]一种检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒包括：微孔板、CD47标准品梯度溶液、样品稀释液、辣根过氧化物酶标记的CD47单克隆抗体2、酶标稀释液、20×浓缩洗涤液、发光液A、发光液B。

2.如权利要求1所述的检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述微孔板为96或48孔微孔板，且其各孔包被有CD47单克隆抗体1(Mab1)。

3.如权利要求1所述的检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述CD47标准品梯度溶液包括浓度梯度为560ng/mL、280ng/mL、140ng/mL、70ng/mL、35ng/mL、0ng/mL的6个CD47标准品溶液，所述CD47标准品梯度溶液以标准品缓冲液配制得到，所述标准品缓冲液为含5wt％牛血清白蛋白、0.85wt％氯化钠的pH＝7.0的1.0mmol/L磷酸氢二钠-磷酸二氢钠的缓冲液。

4.如权利要求1所述的检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液的配方是：以除菌的1000mL纯水计，含NaCl 8g、NaH₂PO₄·2H₂O 0.2g、Na₂HPO₄·12H₂O2.9g、KCl 0.2g、BSA 10g、ProClin^TM950 1mL。

5.如权利要求1所述的检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述酶标稀释液的配方是：NaCl 8.0g、KH₂PO₄ 0.2g、Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g、KCl 0.2g、新生牛血清200mL、Tween20 0.5mL、ProClin^TM950 1mL，纯化水定容至1000mL，pH为7.4；

优选的，所述20×浓缩洗涤液的配方是：以除菌的50mL纯水计，含NaCl 8g、NaH₂PO₄·2H₂O 0.2g、Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g、KCl 0.2g、Tween20 0.5mL。

6.如权利要求1所述的检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述发光液A为过氧化脲溶于pH 5.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，配制成0.1mol/L过氧化脲储备液，然后用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液逐级稀释至工作浓度4.0×10^-3mol/L。

7.如权利要求1所述的检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述发光液B为3.0×10^-3mol/L的鲁米诺溶液与1.6×10^-3mol/L的4-羟基-4′-碘-联苯溶液按照1∶1(v/v)混合所得；

进一步优选的，所述鲁米诺溶液是用0.05mol/L、pH 10.3的碳酸盐缓冲溶液配制成0.1mol/L鲁米诺储备液，避光放置三天，再用0.1mol/L、pH 10.3的NaHCO₃-NaOH缓冲溶液稀释为3.0×10^-3mol/L；

进一步优选的，所述4-羟基-4′-碘-联苯溶液是用重蒸的二甲基亚砜配制成1×10^-2mol/L的4-羟基-4′-碘-联苯溶储备液，再用稀释液稀释成1.6×10^-3mol/L；所述稀释液配方是：以除菌的1000mL纯水计，含有Tween20(1％v/v)12mL。