[发明专利]一种检测CD47的酶联免疫试剂盒及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种检测CD47的酶联免疫试剂盒，其特征在于，包括：碱性磷酸酶标记的纳米金功能化修饰的抗CD47结合物的抗体和样品稀释液；

所述碱性磷酸酶标记的纳米金功能化修饰的抗CD47结合物的抗体是CD47单克隆抗体2(Mab2)和碱性磷酸酶标记的β-Actin单克隆抗体(aMab2)附着于GNP表面组成的组合物aMab2-GNP-Mab2，所述Mab2和aMab2的质量比为(0.5-2):(2-5)；

所述样品稀释液的配方是：以除菌的1000mL纯水计，含NaCl 8g、NaH₂PO₄·2H₂O 0.2g、Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g、表面活性剂S9 3g、酪蛋白钠盐5g、Proclin300 1mL。

2.如权利要求1所述的检测CD47的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述检测CD47的酶联免疫试剂盒还包括：酶标板、CD47标准品梯度溶液、酶标抗体稀释液、20×浓缩洗涤液、显色剂和终止液。

3.如权利要求2所述的检测CD47的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述酶标板为96或48孔酶标板，且其各孔包被有CD47单克隆抗体1(Mab1)。

4.如权利要求2所述的检测CD47的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述CD47标准品梯度溶液包括浓度梯度为400ng/mL、200ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、25ng/mL、0ng/mL的6个CD47标准品溶液，所述CD47标准品梯度溶液由标准品缓冲液配制得到，所述标准品缓冲液为含5wt％牛血清白蛋白、0.85wt％氯化钠的pH 7.0的1.0mmol/L磷酸氢二钠-磷酸二氢钠的缓冲液。

5.如权利要求2所述的检测CD47的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述酶标抗体稀释液的配方是：NaCl 8.0g/L，NaH₂PO₄·2H₂O 0.2g/L，Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g/L，新生牛血清200mL/L，蔗糖30g/L，BSA 10g/L，PEG20000 2g/L，酪蛋白钠盐1g/L，Proclin300 1mL/L，吐温20 2mL/L，pH为7.4，溶剂为纯化水。

6.如权利要求2所述的检测CD47的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述20×浓缩洗涤液的配方是：以除菌50mL双蒸水计，含NaCl 8.0g、NaH₂PO₄·2H₂O 0.2g、Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g、吐温20 0.5mL。

7.如权利要求2所述的检测CD47的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述显色剂是50mgPNPP、1mg MgCl₂·6H₂O与10mL二乙醇胺的混合液，pH 9.8；

优选的，所述终止液是浓度为2mol/L的硫酸溶液。