[发明专利]人FITM1和HIST1H2BJ基因甲基化位点的检测和应用

说明书

本发明提供人FITM1和HIST1H2BJ基因甲基化位点的检测和应用。本发明发现了与原发性肝细胞癌人群相关基因的特异性DNA甲基化位点，包括FITM1基因的甲基化位点cg06186808和HIST1H2BJ基因的甲基化位点cg04424621，并针对该特异性位点设计焦磷酸测序PCR引物和测序引物，通过焦磷酸测序能对该特异性位点的甲基化进行快速准确的定量检测。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及人FITM1和HIST1H2BJ基因甲基化位点的检测和应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

肝癌是全球范围内致死率排名第三的恶性肿瘤，也是我国位居第二的癌症“杀手”。目前对肝癌的治疗主要以手术、放化疗为主，同时结合免疫治疗、中医等其他治疗方法；但由于对于肝癌的发病机制尚不明确及缺乏有效的治疗靶点，中后期的病人治疗效果不佳,生存率低。研究表明，肝癌发生发展是一个表观遗传学调控的过程。DNA甲基化是目前表观遗传学研究的热点之一，它是指在DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase，DNMT)介导下，以S-腺苷蛋氨酸为甲基供体，将甲基基团转移到DNA某些碱基上的过程。DNA甲基化异常被认为是发生肿瘤的一个重要原因。研究肝癌相关基因特异性位点甲基化的改变，有助于了解肝癌的发病机理，为肝癌的预防和治疗提供有效的作用靶点。

FITM1(Fat storage inducing transmembrane protein 1，脂肪贮藏诱导跨膜蛋白1)基因位于14号染色体长臂1区2带，属于一个进化保守的蛋白质家族，参与脂肪储存。Chen J等人研究显示，FITM1是一种抑癌基因，其相关的甲基化特征可以预测非病毒性肝细胞癌患者的预后。但FITM1与肿瘤的相关报道还较少，其DNA特异性位点的甲基化与肝癌的关系目前国内外尚未见报道。

HIST1H2BJ(Histone cluster 1H2B family member j,组蛋白簇1H2B家族成员j)基因存在于人6号染色体短臂2区1带的组蛋白微团簇中。该基因无内含子，编码一个复制依赖的组蛋白，是组蛋白H2B家族的成员。该基因转录本没有polyA尾，而是包含一个回文终止元件。组蛋白是真核生物中负责染色体纤维核小体结构的基本核蛋白。四种核心组蛋白(H2A、H2B、H3和H4)中的每一种的两个分子形成一个八聚体，大约146bp的DNA被包裹在被称为核小体的重复单元中。连接体组蛋白H1与连接体DNA在核小体间相互作用，起着将染色质压缩成高阶结构的作用。据Li XF等报道，HIST1H2BJ基因与宫颈癌的预后相关。但目前该基因异常及基因启动子区甲基化异常与肝癌的关系未见报道。

发明内容

本发明公开了人FITM1基因和HIST1H2BJ基因特异性DNA甲基化位点在肝癌中的甲基化定量信息的改变，具体公开了应用焦磷酸测序技术发现FITM1基因特异性DNA甲基化位点(cg06186808)在肝癌中甲基化程度升高；HIST1H2BJ基因特异性DNA甲基化位点(cg04424621)在肝癌中甲基化程度降低。本发明为探索肝癌的发病机理，找到与诊断或治疗相关的潜在标志物提供了支持。

具体地，本发明提供了下述的技术特征，以下技术特征的一个或多个的结合构成本发明的技术方案。

在本发明的第一方面，本发明提供了检测FITM1基因中甲基化位点的甲基化水平的试剂在制备辅助诊断肝癌的试剂盒中的用途，其中，所述甲基化位点为cg06186808。

其中，FITM1基因特异性位点所在的序列为(SEQ ID No.1)：

CCTGCTCAAGGTGCTGCTCTGGGTGGCCTCTGCCTTGCTGTACTTTGGAAGCGAACAGGC[CG]CCCGCCTTCTGGGCAGCCCCTGCTTACGGCGCCTCTACCATGCCTGGCTGGCAGCAGTGG