[发明专利]一种抗IL-17RA单克隆抗体的纯化方法

权利要求书

1.一种抗IL-17RA单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法包括以下步骤：

S1、亲和层析；

S11、首先，用3-5CV的缓冲液A以100-200cm/h的流速对亲和层析柱进行平衡，将含有抗IL-17RA单克隆抗体的细胞上清液以100-200cm/h的流速进行上样；

S12、其次，上样结束后，使用所述缓冲液A第一次进行再平衡，待紫外信号平稳后，使用缓冲液B进行第二次淋洗，直至紫外吸收值的曲线降至平稳后，停止冲洗；

S13、最后，使用缓冲液C以100-200cm/h的流速对所述亲和层析柱进行洗脱，当所述紫外吸收值上升至100mAU时收集亲和洗脱液，当所述紫外吸收值降至100mAU时结束收集，备用；

所述缓冲液A包括50mM的Tris-HCl、150～160mM的氯化钠，所述缓冲液A的pH为7.2～7.6，所述缓冲液A的电导率为15-20mS/cm；

所述缓冲液B包括50mM的醋酸钠，所述缓冲液B的pH为5.0～6.0，所述缓冲液B的电导率为2-5mS/cm；所述缓冲液C包括醋酸钠、柠檬酸钠或甘氨酸，所述缓冲液C的pH为3.5～3.7；

S2、阳离子交换层析；

S21、首先，使用3-5CV的缓冲液D以100-200cm/h的流速对阳离子交换层析柱进行平衡，将步骤S1中收集的所述亲和洗脱液以100-200cm/h的流速进行上样；

S22、其次，上样结束后，使用所述缓冲液D进行再平衡，待所述紫外吸收值平稳后，使用缓冲液E以100-200cm/h的流速对所述阳离子交换层析柱进行淋洗，冲洗的体积为5-15CV；

S23、最后，使用缓冲液F以100-200cm/h的流速对所述阳离子交换层析柱进行洗脱，当所述紫外吸收值开始上升时收集阳离子洗脱液，当所述紫外吸收值降至300mAU时结束收集，备用；

所述缓冲液D包括20mmol/L的磷酸钠、20mmol/L的柠檬酸钠或20mmol/L的MES缓冲液，所述缓冲液D的pH为6.0，且所述缓冲液D的电导率为2～4mS/cm；所述缓冲液E包括20mmol/L的磷酸钠和10～20mmol/L的氯化钠，所述缓冲液E的pH为7.2～7.4，且所述缓冲液E的电导率为4～6mS/cm；所述缓冲液F包括20mmol/L的磷酸钠和70～100mmol/L的氯化钠，所述缓冲液F的pH为7.2～7.4，且所述缓冲液F的电导率为7～15mS/cm；

S3、阴离子交换层析；

S31、首先，使用7-10CV的缓冲液G以100-200cm/h的流速对阴离子交换层析柱进行平衡，将步骤S2中收集的所述阳离子洗脱液以100-200cm/h的流速进行上样；

S32、上样结束后，再次使用所述缓冲液G进行冲洗，待所述紫外吸收值上升至100mAU时，开始收集流穿液，待所述紫外吸收值降至200mAU时结束收集；

所述缓冲液G包括20mmol/L的磷酸钠和50～80mmol/L的氯化钠，所述缓冲液G的pH为7.2～7.4，且所述缓冲液G的电导率为6～12mS/cm；

步骤S1中，所述抗IL-17RA单克隆抗体选自以下任意一种：

mAb-6，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:6，其轻链可变区的氨基酸序列为SEQID NO:12；

mAb-7，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:7，其轻链可变区的氨基酸序列为SEQID NO:12。

2.如权利要求1所述的抗IL-17RA单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，所述单克隆抗体还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区为人的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4中的一种，所述轻链恒定区为人的Cκ。

3.如权利要求2所述的抗IL-17RA单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，所述重链恒定区为人的IgG1。

4.如权利要求1所述的抗IL-17RA单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，步骤S1中，所述亲和层析柱的介质为MabSelect SuRe、MabSelect Sure LX或Eshmuno-A。