[发明专利]IL-2受体复合物及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了IL‑2受体复合物及其制备方法与应用。本发明的IL‑2受体复合物是将编码融合蛋白I（SEQ ID NO:1或7）、融合蛋白II（SEQ ID NO:3或9）的核酸序列构建到同一真核表达载体或分别构建到不同真核表达载体上，用所得重组表达载体转染哺乳动物细胞，并从细胞培养上清中分离纯化得到的。本发明利用基因工程技术，通过重组表达及一步亲和层析纯化直接获得IL‑2受体αβγ异源三聚体蛋白，无需体外组装；该异源三聚体蛋白与IL‑2具有高亲和活性，可用于体外研究IL‑2与IL‑2受体的相互作用、免疫动物制备抗体或抗体的体外筛选等。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地说，涉及IL-2受体复合物及其制备方法与应用。

背景技术

Interleukin-2（IL-2）是最早发现的细胞因子之一，又称为T细胞生长因子（Tcell growth factor,TCGF）。1976年NCI肿瘤细胞生物学实验室的RobertGallo，使用PHA刺激淋巴细胞产生条件培养基培养骨髓细胞，发现其中90%的T细胞长达9个月的生存维持。而在此之前，原代T细胞无法进行体外培养，是免疫学发展中的瓶颈性技术问题。该支持T细胞长期生长的物质被称为T细胞生长因子（TCGF），也就是IL-2。IL-2对T细胞的增殖、发育、分化和凋亡具有重要的作用。

IL-2的受体interleukin-2 receptor(IL-2R)包含α、β和γ三个亚单位。三个亚单位可以组成不同亲和力的受体，其中，单独的α为低亲和力受体，单独存在不参与信号传导，β和γ组成中等亲和力的受体，下游可以通过JAK传导信号，在α参与的情况下，亲和力增强为高亲和力受体。IL-2与其受体特异性结合后，启动Jak-STAT、MAPK及P13K等多种途径，抑制凋亡，诱导细胞增殖、分化，产生多种生物学效应。从20世纪90年代起，科研人员开始通过突变IL-2和不同受体亚单位的亲和力，或制备针对IL-2受体的抗体，以达到抗肿瘤或治疗自身免疫疾病的临床治疗效果。

尽管IL-2Rα、β和γ可形成对IL-2高亲和力的受体复合物，但α亚单位与β、γ亚单位形成受体复合物时并没有直接接触。根据结构报道，α位于IL-2的一侧，而β和 γ形成”Y”形，位于IL-2的另一侧（Xinquan Wang et al.,2005, Science. 310(5751):1159-63.）。因此在没有IL-2存在时，α、β和γ无法直接形成高亲和力的IL-2受体复合物。这也限制了针对IL-2R αβγ异源三聚体的抗体制备等应用。

发明内容

本发明的目的是提供IL-2受体复合物（IL-2受体αβγ异源三聚体复合物）及其制备方法与应用。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种IL-2受体复合物，其是将编码融合蛋白I、融合蛋白II的核酸序列构建到同一真核表达载体或分别构建到不同真核表达载体上，用所得重组表达载体转染哺乳动物细胞，并从细胞培养上清中分离纯化得到的。

其中，所述融合蛋白I是由IL-2R β亚单位或其变体与异源二聚元件1之间通过柔性linker连接而成；

所述融合蛋白II是先将IL-2R α亚单位或其变体与IL-2R γ亚单位或其变体之间先通过柔性linker连接，再与异源二聚元件2之间通过柔性linker连接而成；

任选地，所述融合蛋白I、融合蛋白II的C端含有纯化标签（如抗体Fc标签或其他亲和标签）；

其中，所述异源二聚元件1为Fc-Knob，异源二聚元件2为Fc-Hole；或者，

所述异源二聚元件1为Fc-Hhole，异源二聚元件2为Fc-Knob；或者，

所述异源二聚元件1为序列如SEQ ID NO:5所示的亮氨酸拉链，异源二聚元件2为序列如SEQ ID NO:6所示的亮氨酸拉链；或者，