[发明专利]基于DNA折纸的二分体脱氧核酶结构及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 202110191122.3 | 申请日： | 2021-02-20 |
| 公开（公告）号： | CN112831499B | 公开（公告）日： | 2022-12-02 |
| 发明（设计）人： | 宋杰;范思思 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;A61K31/7088;A61P35/00 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 范艳静 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 dna 折纸 分体 脱氧 结构 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种基于DNA折纸的二分体脱氧核酶复合物的制备方法，其特征在于：其包括如下步骤：
（1）、通过退火的方式形成DNA折纸结构；
（2）、将脱氧核酶的二分体酶链a和酶链b通过恒温孵育的方式嵌入所述DNA折纸结构上，进行电泳纯化，得到纯化后的DNA折纸-酶链a-酶链b结构；
（3）、在所述纯化后的DNA折纸-酶链a-酶链b结构内加入帮助链，通过恒温孵育的方式，得到基于DNA折纸的二分体脱氧核酶复合物；
步骤（2）中，所述酶链a中的催化核心碱基序列为GGCTAGCT，所述酶链b中的催化核心碱基序列为ACAACGA；
步骤（2）中，所述纯化后的DNA折纸-酶链a-酶链b结构中酶链a和酶链b之间的距离为5nm；
步骤（3）中，得到基于DNA折纸的二分体脱氧核酶复合物后，加入摩尔比2:1的双标记的底物链和基于DNA折纸的二分体脱氧核酶复合物混合，恒温孵育，通过荧光信号验证二分体脱氧核酶是否有效组装在DNA折纸结构上；
所述双标记的底物链为5´端经FAM标记和3´端经BHQ标记的序列；
所述恒温孵育的条件为：pH值为8.0的TAE缓冲溶液，温度为37℃，时间为1-24h；
步骤（3）中，帮助链为加入帮助脱氧核酶组装的DNA链，分别将酶链a和酶链b中的一段序列互补配对，从而起到固定脱氧核酶的作用。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，所述退火的方式为：将骨架链和订书钉链按照摩尔比1:10-1:5混合，通过退火以1℃/min的速率从95℃降至25℃。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，所述DNA折纸结构选自二维或三维中的一种以上。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，所述电泳纯化的条件为：1×TAE缓冲液，琼脂糖凝胶的质量/体积浓度为0.8-1.0%，电压为60-65V，冰浴的时间为100-120min。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，所述恒温孵育的条件为：温度为40℃，时间为3h。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，所述恒温孵育的条件为：温度为40℃，时间为2h。
7.一种基于DNA折纸的二分体脱氧核酶复合物，其特征在于：其由权利要求1-6任一项所述的制备方法得到。
8.如权利要求7所述的基于DNA折纸的二分体脱氧核酶复合物在制备癌症的靶向治疗材料中的应用。
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