[发明专利]一种检测慢病毒介导的基因修饰细胞中复制型病毒的引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测慢病毒介导的基因修饰细胞中复制型病毒的引物组，其特征在于，包括RCL-1引物组或RCL-2引物组；所述RCL-1引物组包括引物FP-1、引物RP-1和荧光探针P1；所述RCL-2引物组包括引物FP-2、引物RP-2和荧光探针P2；所述引物FP-1、引物RP-1和荧光探针P1的核苷酸序列分别如SEQ ID No.1～SEQ ID No.3所示，所述引物FP-2、引物RP-2和荧光探针P2的核苷酸序列分别如SEQ ID No.4～SEQ ID No.6所示。

2.一种检测慢病毒介导的基因修饰细胞中复制型病毒的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组和检测试剂。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述引物FP-1、引物RP-1和荧光探针P1的使用浓度独立为8～12μmol/L；所述引物FP-2、引物RP-2和荧光探针P2的使用浓度独立为8～12μmol/L。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述检测试剂包括qPCR扩增MIX、阳性标准品和阴性质控品。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性标准品为复制型vsvg质粒。

6.一种检测慢病毒介导基因修饰的细胞中复制型病毒的方法，包括以下步骤：

1)提取待检测细胞的总RNA后，反转录获得反转录产物；

2)以步骤1)中获得的反转录产物为模板，以权利要求1中所述的RCL-1引物组或RCL-2引物组为引物进行qPCR扩增获得待检测细胞qPCR扩增的Ct值；

3)当Ct值≥33.92时，所述待检测细胞中不存在复制型病毒，当Ct值＜33.92时，所述待检测细胞中存在复制型病毒。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述qPCR扩增的扩增体系，以20μL计，包括RNA模板4μL、引物FP-1 0.4μL、引物RP-1 0.4μL、荧光探针P1 0.4μL、qPCR扩增MIX10μL和ddH₂O 4.8μL；

或者包括RNA模板4μL、引物FP-2 0.4μL、引物RP-2 0.4μL、荧光探针P2 0.4μL、qPCR扩增MIX 10μL和ddH₂O 4.8μL。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述qPCR扩增的扩增程序包括以下步骤：95℃10min；95℃15s，60℃1min，40个循环。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述待检测细胞设置2～4个重复。

10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，当采用RCL-2引物组为引物进行qPCR扩增时，将所述反转录产物线性化后作为模板。