[发明专利]一种靶向IL-16基因的sgRNA、质粒组及基因敲除方法和应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种靶向IL‑16基因的sgRNA、质粒组及基因敲除方法和应用。本发明所述sgRNA包括sgRNA1或sgRNA2；所述sgRNA1包括sgRNA1‑S和sgRNA1‑A；所述sgRNA2包括sgRNA2‑S和sgRNA2‑A。本发明提供的靶向IL‑16基因的sgRNA不仅能够稳定敲除白血病肿瘤细胞内的IL‑16基因，而且可用于制备抑制肿瘤增殖的药物。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种靶向IL-16基因的sgRNA、质粒组及基因敲除方法和应用。

背景技术

IL-16也被称为淋巴细胞趋化因子。目前，尚未发现与其同家族的其它细胞因子，在不同物种间，其具有高度保守性。人的IL-16基因全长153kbp，位于人类基因位于15q26.3染色体上。IL-16前体蛋白其含有631个氨基酸，分子量为80kDa。一旦被激活，储存在细胞中的前体IL-16就会被caspase-3分子切割，含有N末端结构域的部分形成分子量为60kDa的非分泌型蛋白；含有C末端结构域的部分形成分子量为20kDa分泌型蛋白。在淋巴细胞中，含有N末端结构域的分子可以和转录因子结合，进而影响细胞周期。而成熟的含有C末端结构域的IL-16可以从细胞中分泌，和相应的配体结合。IL-16表达水平在各种疾病的发病机制中起着重要的作用，如骨质疏松症、肾细胞癌、阿尔茨海默病、炎症性肠病等。但现有技术中还未有关于稳定敲除白血病肿瘤细胞内的IL-16基因对其影响的报道。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种靶向IL-16基因的sgRNA、质粒组及基因敲除方法和应用。本发明提供的靶向IL-16基因的sgRNA能够稳定敲除白血病肿瘤细胞内的IL-16基因，从而使得白血病肿瘤细胞停滞于G0期，进而影响肿瘤细胞的增殖。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供一种靶向IL-16基因的sgRNA，所述sgRNA包括sgRNA1或sgRNA2；

所述sgRNA1包括sgRNA1-S和sgRNA1-A；所述sgRNA1-S的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示，所述sgRNA1-A的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述sgRNA2包括sgRNA2-S和sgRNA2-A；所述sgRNA2-S的核苷酸序列如SEQ IDNo.3所示，所述sgRNA2-A的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

本发明还提供一种用于敲除IL-16基因的质粒组，所述质粒组包括sgRNA1质粒组或sgRNA2质粒组；

所述sgRNA1质粒组包括sgRNA1-S质粒和sgRNA1-A质粒；所述sgRNA1-S质粒包括上述方案所述的sgRNA1-S和px330质粒；所述sgRNA1-A质粒包括上述方案所述的sgRNA1-A和px330质粒；

所述sgRNA2质粒组包括sgRNA2-S质粒和sgRNA2-A质粒；所述sgRNA2-S质粒包括上述方案所述的sgRNA2-S和px330质粒；所述sgRNA2-A质粒包括上述方案所述的sgRNA2-A和px330质粒。

优选的，所述px330质粒包括经BbsⅠ酶后的px330大片段质粒。

优选的，所述sgRNA1-S、sgRNA1-A、sgRNA2-S或sgRNA2-A与px330质粒的摩尔比独立为10:1。

优选的，所述sgRNA1-S和sgRNA1-A的摩尔比为1:1；所述sgRNA2-S和sgRNA2-A的摩尔比为1:1。

本发明还提供一种利用CRISPR/Cas9系统敲除肿瘤细胞中IL-16基因的方法，包括以下步骤：

将上述方案所述质粒组导入肿瘤细胞中，得到敲除IL-16基因的肿瘤细胞。