[发明专利]一种锌离子诱导重组蛋白表达体系、其诱导方法和应用有效
| 申请号： | 202110193567.5 | 申请日： | 2021-02-20 |
| 公开（公告）号： | CN112899209B | 公开（公告）日： | 2023-02-03 |
| 发明（设计）人： | 王伍;李江辉;周易;周怀彬;谭国强;周晓峰 | 申请（专利权）人： | 温州医科大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N15/31;C12N9/12;C12N9/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京东方盛凡知识产权代理有限公司 11562 | 代理人： | 王颖 |
| 地址： | 325000 浙江省温州市瓯海经济*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 离子 诱导 重组 蛋白 表达 体系 方法 应用 | ||
1.一种锌离子诱导的重组蛋白表达体系，其特征在于，所述的表达体系包括宿主大肠杆菌和表达载体；所述宿主大肠杆菌中zntA基因被敲除；所述表达载体中包括加入优化的MCS序列的大肠杆菌锌耐受操纵子znt的启动子序列，所述启动子序列的核苷酸序列如SEQID NO.5所示。
2.一种锌离子诱导重组蛋白表达的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
（1）将目的蛋白的编码序列克隆到表达载体中；
（2）得到的表达载体转化入宿主大肠杆菌中过夜生长；
（3）过夜生长的菌株加入培养基中培养至对数生长期；
（4）再向菌株培养基中添加含锌离子液体进行诱导；
所述宿主大肠杆菌中zntA基因被敲除；所述表达载体中包括加入优化的MCS序列的大肠杆菌锌耐受操纵子znt的启动子序列，所述启动子序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
3.根据权利要求2所述的锌离子诱导重组蛋白表达的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述的菌株培养基为新鲜的LB培养基或2×LB培养基。
4.根据权利要求2所述的锌离子诱导重组蛋白表达的方法，其特征在于，步骤（3）中过夜生长的菌株加入培养基中时，使起始菌液OD600值为0.02。
5.根据权利要求2所述的锌离子诱导重组蛋白表达的方法，其特征在于，步骤（4）中所述的含锌离子液体的浓度为2-2000μmol/L。
6.根据权利要求2所述的锌离子诱导重组蛋白表达的方法，其特征在于，步骤（4）中所述的含锌离子液体为含锌工业废水。
7.根据权利要求2所述的锌离子诱导重组蛋白表达的方法，其特征在于，步骤（4）中所述的诱导条件为16℃诱导24h。
8.根据权利要求2-7任一项所述的锌离子诱导重组蛋白表达的方法，其特征在于，所述的目的蛋白为Pfu蛋白或YqhD蛋白。
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