[发明专利]一种分子信标探针及其在制备检测circBART2.2制剂中的应用和试剂盒

说明书

本发明提供了一种分子信标探针及其在制备检测circBART2.2制剂中的应用和试剂盒。该分子信标探针能与circBART2.2杂交，T7Exo再对杂交复合物进行酶切，释放出来的荧光团使荧光信号增强，而释放的circBART2.2继续与分子信标探针杂交，实现循环，使荧光信号得到显著增强，从而达到检测circBART2.2的目的。该方法不需要复杂的仪器，操作简便，特异性好、灵敏度高，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于环状RNA检测技术领域，具体涉及一种分子信标探针及其在制备检测circBART2.2制剂中的应用和试剂盒。

背景技术

病毒编码的circRNA是近年来的研究热点，EB病毒(EBV)是疱疹病毒科嗜淋巴细胞病毒属的成员，基因组为DNA。EBV感染与淋巴瘤、鼻咽癌、胃癌、乳腺癌等多种癌症密切相关，对EBV编码的circRNA的灵敏检测能够为EBV相关疾病的早期诊断提供一些帮助。circBART2.2为EBV编码的一种circRNA，它在淋巴瘤等的发生发展中具有重要作用，对其灵敏、准确地检测有助于临床上更好地了解疾病的发展进程，对其诊疗具有重要意义。

目前报道的circRNA检测方法包括：实时荧光聚合酶链式反应(qRT-PCR)、northern blotting、二代测序、微阵列分析法等，但它们都存在一定的局限性。qRT-PCR需要一个必要的逆转录步骤来获得cDNA，然后是扩增步骤，这增加了实验成本和设计的复杂性，还可能有假阳性结果；Northern blotting步骤多，杂交时间长，样本量大，灵敏度不高；二代测序和微阵列技术检测步骤繁琐且所用费用高等都限制了其广泛使用。

因此，研发新的高灵敏度、高特异性、低成本、高效简洁的检测方法及配套检测工具是目前亟待解决的问题。

发明内容

本发明的首要目的是针对上述现有技术存在的问题和缺陷，提供一种用于检测circBART2.2的分子信标探针MB。利用该分子信标探针能与circBART2.2特异性杂交，T7Exo能够对杂交复合物进行酶切的特性，释放的荧光团可以使荧光信号增强，而circBART2.2可以继续与MB杂交，实现杂交、酶切、释放的循环过程，使体系的荧光信号得到数倍增强，从而达到灵敏检测circBART2.2的目的。

本发明的分子信标探针，序列为：BHQ1-ACG CCG GAC CTT GCC CGT TTT TTT GTCCGG-FAM。

本发明的次要目的是提供上述的分子信标探针在制备检测circBART2.2制剂中的应用。

本发明的第三个目的是提供上述的分子信标探针在检测circBART2.2中的应用。将分子信标探针加入到含有T7核酸外切酶和待检测样品的体系中反应，检测荧光强度，通过标准曲线法获得circBART2.2的浓度。

上述的应用，体系中T7核酸外切酶浓度为100-200U/ul；优选100U/ul。

上述的应用，体系中分子信标探针浓度为100-300nM，优选200nM。

上述的应用，反应温度35-40℃，反应时间3-5h。

上述的应用，反应温度37℃，反应时间3h。

上述的应用，反应体系中还需要加入buffer，RNase inhibitor，无酶水。

本发明方法排除诊断目的的应用。

本发明的第四个目的是一种检测circBART2.2的试剂盒，包含上述的分子信标探针和T7核酸外切酶。

进一步地，还包括：buffer，RNase inhibitor，无酶水。