[发明专利]基于夹心法的SARS-CoV-2检测试剂盒

说明书

本发明涉及生物医药领域，具体而言，涉及一种基于夹心法的SARS‑CoV‑2检测试剂盒。该试剂盒包括：a)固相偶联物；所述固相偶联物由固相载体及包被于所述固相载体上的抗原和抗体组成；所述抗体为抗新冠病毒核衣壳N蛋白的单克隆抗体；所述抗原包括：SARS‑CoV‑2Spike蛋白的S1亚基、S2亚基、RBD、N蛋白及E蛋白；b)标记有化学发光标记物的抗原及抗体；所述抗体为与新冠病毒核衣壳N蛋白的单克隆抗体，但与a)中的抗体结合的抗原表位不同；所述抗原包括：SARS‑CoV‑2Spike蛋白的S1亚基、S2亚基、RBD、N蛋白及E蛋白。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体而言，涉及一种基于夹心法的SARS-CoV-2检测试剂盒。

背景技术

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)属于β属的冠状病毒，颗粒呈圆形或椭圆形，直径60nm～140nm，且相比于SARS，具有更高的感染能力。新型冠状病毒具有很强的人际间传播能力，人群普遍易感，病人是最重要的传染源，因此做到无症状感染者、疑似和确诊病例早发现、早隔离、早治疗依旧是接下来疫情防控的主线。如何准确的检测病毒，快速识别出新冠感染患者，减少交叉感染；以及如何有效监控疾病进程和抗体产生情况，将是打好疫情攻坚战的重点。基于流行病学调查，新型冠状病毒所导致的疾病COVID-19的潜伏期为1～14天，多为3～7天，症状以发热、干咳、乏力为主，重症患者多在发病一周后出现呼吸困难和/或低氧血症，严重者可快速发展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出现凝血功能障碍及多器官功能衰竭等。

新型冠状病毒包含刺突蛋白(Spike protein)、包膜蛋白(Envelope protein)、膜蛋白(Membrane protein)、核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein)等4种主要结构蛋白。其中刺突蛋白形成冠状病毒外层，通过形成三聚体在病毒表面上形成明显的刺突，在诱导中和抗体和T细胞反应保护性免疫中起关键作用，刺突蛋白包含两个亚基S1和S2的大型1型跨膜蛋白，S1主要包含一个受体结合域(Receptor Binding Domian，RBD)，负责识别细胞表面受体ACE2(血管紧张素转换酶2)的蛋白质上，介导病毒入侵细胞；S2包含膜融合所需的基本元素。包膜蛋白是一种结构蛋白。一旦病毒进入细胞内部，它可以锁定蛋白质，从而帮助打开和关闭被感染细胞的基因组；膜蛋白是形成病毒外壳的另一种结构蛋白。而位于病毒内部的N蛋白可以保护病毒RNA，使其在病毒内部保持稳定，许多N蛋白以长螺旋形连接在一起包裹RNA，在序列上比较保守。这几种结构蛋白在病毒的识别吸附、膜融合、复制组装、释放周期中发挥关键作用，能不同程度的诱导抗体和T细胞反应保护性免疫，也是血清抗原抗体检测的主要设计靶点。

据《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)》中规定，目前确诊COVID-19的方法为使用实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性，或病毒基因测序，但疫情发展至今，核酸检测试剂的漏检问题一再暴露，阳性检出率只有30-50％，主要是由于采样方式局限性造成的。核酸检测，一般是通过收集疑似患者鼻咽拭子，提取其中的RNA片段进行荧光RT-PCR，采样过程中，会混入大量人体细胞、细菌，进而造成待测RNA丰度低，检测系统无法检测，最终导致假阴性的产生。同时，其采样方式会造成采样人员暴露于可能含有病原体的环境中，有潜在的感染风险。样品制备过程，需要步骤多、操作时间长，对检测人员的技术水平要求高。

化学发光技术主要依据检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下成定量线性关系的原理，利用配套的仪器对化学发光强度进行检测，从而确定待测物的含量，具有灵敏度高、报告速度快、自动化程度高等突出的特点，现已广泛应用于医学检验领域。

依据抗原抗体结合的免疫学原理，也可应用化学发光技术对病毒进行检测。目前与新型冠状病毒肺炎相关的检测集中于IgG和IgM上，针对抗原的检测较少。这是由于感染早期，病人血液中病毒滴度低，需要高灵敏度的检测方法，另外，血液中的病毒，可能已被相关抗体所识别，不对样品进行处理，很难释放出抗原表位，进而造成测试结果假阴性。