[发明专利]一种促进干细胞细胞因子产量的生产方法

说明书

本发明涉及一种促进干细胞细胞因子产量的生产方法，该方法使用了能够特异性针对PTN的单克隆抗体，所述抗体能够有效的诱导骨髓间充质干细胞成脂分化，并且在分化后能够高效的促进SCF和VEGF细胞因子高分泌，通过分离纯化含有所述高产量的细胞因子可以用于后续的研究。

技术领域

本申请涉及生物领域，更具体的，涉及一种一种促进干细胞细胞因子产量的 生产方法。

背景技术

间充质干细胞(MSCs)是干细胞家族的重要成员，不仅存在于骨髓、脂肪、脐 血和外周血中，还存在于软骨膜、骨膜、肌肉及骨小梁中。目前研究较多的是骨 髓间充质干细胞(BMSCs)。其基本特性有：自我更新能力，在体内可增殖形成组 织并维持自身的数量，在体外可克隆生长。增殖分化能力，在一定环境和特定因 子的诱导下，可以分化为肌肉、神经、软骨、骨、脂肪、肌腱及韧带等组织。由 于BMSCs具有可多向分化、体外扩增能力强、来源广泛、取材方便、对机体损伤 小等优点，已成为骨组织工程研究目前最常用的种子细胞。其在体外分化需要适 宜的培养条件或诱导剂，相关生长因子可以促进其增殖与分化，并依赖于细胞因 子的调节。

骨质疏松症是以骨量减少、骨的微观结构退化为特征，致使骨的脆性增加以 致易于发生骨折的一种全身性骨骼疾病。骨组织中成骨细胞和破骨细胞的功能失 衡是导致骨质疏松症的主要病因。现已证实，骨髓腔内的脂肪细胞增加与骨形成 能力下降存在密切的联系。而且骨髓腔内的脂肪细胞和成骨细胞均来源于骨髓间 充质干细胞，两者具有相同的细胞表型，在一定条件下可以互相转换，并且存在 此消彼长的关系。而骨质疏松症可能是骨髓间充质干细胞分化失衡后过多地向脂 肪细胞分化所致。因此，通过抑制骨髓间充质干细胞向成脂方向分化来防治骨质 疏松症很值得我们研究。现阶段骨质疏松症治疗药物主要是针对破骨细胞和成骨 细胞而研制，虽然对骨质疏松症有一定疗效，但存在不良反应大及患者不能长期 耐受等缺点。迄今为止，还没有一种安全有效的药物帮助已疏松的骨骼恢复原状。 因此，研究骨髓间充质干细胞在转化为成脂过程中的某些重要影响因素，可为骨质疏松症的发病机制研究及药物筛选提供一定基础。长期研究发现，雌激素、维 生素D3、PPARS等细胞核激素受体可影响骨髓间充质干细胞向成脂方向分化。因 此，研究骨髓间充质干细胞的成脂分化时目前重要的研究方向。

此外，骨髓间充质干细胞能够合成并分泌多种细胞因子，如表皮生长因子、 碱性成纤维细胞生长因子、血小板生长因子、血管内皮生长因子、转化生长因子、 肝细胞生长因子、白介素6等。这些因子在干细胞成脂分化过程中的表达各不相 同。此前研究表明，黄芪甲甙与MSCs共培养后，MSCs的增殖指数明显增加，黄芪 甲甙促进MSCs增殖呈时间依赖性，但当达到一定的药物浓度后，增殖指数将不再 增加。通过检测SCF、TPO、GM—CSF、TGF的表达发现，加入黄芪甲甙后SCF的表 达较对照组明显增高，其他细胞因子的表达差异无统计学意义，亦未见IL-3mRNA 的表达，因此，黄芪甲甙可以诱导和促进MSCs分泌SCF。该方法，可以用于特定 的SCF的生产和富集，用于后续的治疗用途。

然而在现有技术中，还没有验证促进骨髓间充质干细胞快速增殖后成脂分 化，检测相应细胞因子的变化情况，更没有涉及相应的细胞因子的生产和富集的 研究。

发明内容

本发明针对现有技术的缺陷，提供了一种改进的促进细胞因子分泌的方法， 特别是高表达的SCF和VEGF细胞因子。

本发明一方面，提供一种特异性针对PTN的单克隆抗体，所述单克隆抗体的轻 链可变区的序列为(SEQ ID NO：1)，重链可变区的序列为(SEQ ID NO：2)。

本发明更进一步的，提供所述改进的针对PTN的单克隆抗体，所述改进为保守 修饰或者保守修饰的变体。