[发明专利]KIR3DL1基因分型试剂盒和分型方法

说明书

本发明公开一种KIR3DL1基因分型试剂盒和分型方法，其中，本发明KIR3DL1基因分型试剂盒包括扩增引物一、扩增引物二、扩增引物三、扩增引物四、测序引物一、测序引物二、测序引物三、测序引物四、测序引物五、测序引物六、测序引物七、测序引物八、测序引物九、测序引物十、测序引物十一、测序引物十二、测序引物十三、测序引物十四、测序引物十五以及测序引物十六。本发明通过多种扩增引物对KIR3DL1基因进行PCR扩增，多种测序引物对扩增的PCR产物进行测序扩增，进而对测序扩增产物进行测序，发现其他方法不易鉴定的新等位基因型，实现对KIR3DL1基因的高分辨分型。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种KIR3DL1基因分型试剂盒和分型方法。

背景技术

自然杀伤细胞(Natural Killer cell，NK细胞)在人体内通过细胞因子和细胞毒作用，抵御感染和杀灭恶变细胞，在先天免疫和获得性免疫中发挥着重要作用。杀伤细胞免疫球蛋白样受体(Killer cell Immunoglobulin-like Receptor，KIR)是主要表达于NK细胞和部分T细胞表面的一组免疫球蛋白样超家族成员，能够特异性地识别人类主要组织相容性复合物MHC-I类分子(Human Leukocyte Antigen I，HLA-I)，介导调节NK细胞和部分效应T细胞的杀伤功能。越来越多的临床移植和动物实验证据提示，供、受者的KIR不相容引发的NK细胞异源反应，有利于异基因造血干细胞移植和器官移植的预后。异源反应性NK细胞可以特异性杀伤宿主抗原呈递细胞和白血病细胞，从而降低移植物抗宿主病(Graft-Versus-Host Disease，GVHD)发生的风险，减轻排斥反应，起到移植物抗白血病效果。此外，KIR还与众多疾病具有相关性，包括自身免疫病、病毒感染疾病、肿瘤、妊娠相关疾病等。

KIR基因位于染色体19q13.4，具有高度多态性，目前已检测出14个KIR功能基因和2个假基因。截止2019年12月，已发现1110个等位基因。杀伤细胞免疫球蛋白样受体KIR3DL1基因是KIR基因家族中的一员，共有9个外显子。

随着移植免疫研究的深入，HLA半相合移植的方案得到推广，如何在众多的供者中抉择出最优的供者成为临床专家面临的难题。在此形势下，KIR基因分型得到越来越多临床专家的重视，检测技术的不断发展也使得高分辨分型成为趋势。KIR分型方法包括序列特异性引物PCR(PCR-SSP)、逆转录PCR(RT-PCR)和PCR-序列特异性寡聚核苷酸探针(PCR-SSO)等方法。但是，由于KIR基因具有高度多态性，且多态性位点分布具有随机性，上述多种检测方法存在漏检、误检的风险，无法实现对KIR3DL1基因的高分辨分型。

上述内容仅用于辅助理解发明的技术方案，并不代表承认上述内容是现有技术。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种KIR3DL1基因分型试剂盒，旨在实现对KIR3DL1基因的高分辨分型，广泛用于造血干细胞移植配型、疾病关联研究等领域。

为实现上述目的，第一方面，本发明提出一种KIR3DL1基因分型试剂盒，包括：

扩增引物一，核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

扩增引物二，核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

扩增引物三，核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

扩增引物四，核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；

测序引物一，核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；

测序引物二，核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；

测序引物三，核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；

测序引物四，核苷酸序列如SEQ ID No.8所示；