[发明专利]鉴定靶蛋白染色质结合图谱的快速建库方法有效
| 申请号： | 202110199598.1 | 申请日： | 2021-02-23 |
| 公开（公告）号： | CN112553695B | 公开（公告）日： | 2021-05-11 |
| 发明（设计）人： | 江翱;曹振;宋东亮 | 申请（专利权）人： | 翌圣生物科技（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06 |
| 代理公司： | 苏州根号专利代理事务所(普通合伙) 32276 | 代理人： | 朱华庆 |
| 地址： | 200120 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鉴定 蛋白 染色质 结合 图谱 快速 方法 | ||
1.一种鉴定靶蛋白染色质结合图谱的快速建库方法，其特征在于其步骤包括：
（1）用离心的方式收集样本细胞，将细胞重悬于缓冲液中；
（2）将活化的磁珠加入细胞中孵育，分离收集磁珠；
（3）步骤（2）获得的磁珠与含细胞穿孔剂的一抗进行孵育，分离收集磁珠；
（4）二抗与重组融合转座酶预结合，步骤（3）获得的磁珠与预先结合的二抗和重组融合转座酶混合物进行孵育，分离收集磁珠，其中所述重组融合转座酶为Protein A-Tn5、Protein G-Tn5或Protein AG-Tn5，二抗与重组融合转座酶预结合具体为将二抗与重组融合转座酶混合后在室温下孵育；
（5）步骤（4）获得的磁珠中加入转座酶激活剂，孵育一段时间；
（6）终止转座酶反应；
（7）文库扩增。
2.根据权利要求1所述的鉴定靶蛋白染色质结合图谱的快速建库方法，其特征在于：所述磁珠为伴刀豆蛋白A磁珠或抗体偶联免疫磁珠。
3.根据权利要求1所述的鉴定靶蛋白染色质结合图谱的快速建库方法，其特征在于：所述转座酶激活剂为二价金属离子。
4.根据权利要求3所述的鉴定靶蛋白染色质结合图谱的快速建库方法，其特征在于：所述转座酶激活剂为镁离子、锰离子、锌离子、钙离子或钴离子，或者上述离子的混合物。
5.根据权利要求1所述的鉴定靶蛋白染色质结合图谱的快速建库方法，其特征在于：所述细胞穿孔剂为非离子型表面活性剂。
6.根据权利要求5所述的鉴定靶蛋白染色质结合图谱的快速建库方法，其特征在于：所述细胞穿孔剂为聚乙二醇辛基苯基醚、乙基苯基聚乙二醇、毛地黄皂苷或吐温，处理细胞的浓度为0 .005-0 .5%。
7.根据权利要求1所述的鉴定靶蛋白染色质结合图谱的快速建库方法，其特征在于：终止转座酶反应的方法为SDS热失活、蛋白酶K降解或EDTA螯合金属离子。
8.根据权利要求1所述的鉴定靶蛋白染色质结合图谱的快速建库方法，其特征在于：在步骤（6）中还掺入DNA标准品。
9.根据权利要求8所述的鉴定靶蛋白染色质结合图谱的快速建库方法，其特征在于：所述DNA标准品为lambda DNA、酵母基因组DNA或者果蝇基因组DNA中的一个或者多个片段。
10.根据权利要求1所述的鉴定靶蛋白染色质结合图谱的快速建库方法，其特征在于：步骤（1）中的缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液或PIPES缓冲液，缓冲液pH为7 .5-8 .5，NaCl浓度为150 mM。
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