[发明专利]一种花药培养获得百脉根再生植株的方法

说明书

本发明属于植物组织技术领域，公开了一种花药培养获得百脉根再生植株的方法，包括进行外植体花药的准备；将外植体花药置于诱导组织培养基上进行培养，得到愈伤组织；分批挑选大小、颜色、质地一致的花药愈伤组织转移到胚诱导培养基中培养得到胚性愈伤组织；将培养得到的胚性愈伤组织转入愈伤组织继代培养基暗培养，培养出继代胚性愈伤组织；将继代胚性愈伤组织进行胚状体诱导培养，并将得到的胚状体转接到无激素的再生培养基上，进行培养得到百脉根再生植株。本发明通过将外植体进行低温处理、表面消毒及愈伤组织的培养分化获得了百脉根再生植株，解决了百脉根为同源四倍体，自交不亲和，具有高度的杂合性的问题。

技术领域

本发明属于植物组织技术领域，尤其涉及一种花药培养获得百脉根再生植株的方法。

背景技术

目前：百脉根原产于欧、亚温暖地带，是豆科百脉根属多年生牧草。具有产草量高、绿期长、蛋白含量高、营养丰富、适口性好且家畜采食后不发生鼓胀等优点。百脉根具有耐热、耐水淹、耐瘠薄、耐酸等特点，是我国温暖湿润地区极有希望的优良牧草。因此，开展百脉根的育种研究工作对于南方草地畜牧业的发展具有十分重要的意义。

栽培百脉根为同源四倍体，自交不亲和，具有高度的杂合性，采用常规育种进程缓慢、效率差。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：栽培百脉根为同源四倍体，自交不亲和，具有高度的杂合性，采用常规育种进程缓慢、效率差。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种花药培养获得百脉根再生植株的方法。

本发明是这样实现的，一种花药培养获得百脉根再生植株的方法，所述花药培养获得百脉根再生植株的方法包括以下步骤：

步骤一，进行外植体花药的准备；将外植体花药置于诱导组织培养基上进行培养，得到愈伤组织；

步骤二，分批挑选大小、颜色、质地一致的花药愈伤组织转移到胚诱导培养基中培养得到胚性愈伤组织；

步骤三，将培养得到的胚性愈伤组织转入愈伤组织继代培养基暗培养，培养出继代胚性愈伤组织；

步骤四，将继代胚性愈伤组织进行胚状体诱导培养，并将得到的胚状体转接到无激素的再生培养基上，进行培养得到百脉根再生植株。

进一步，步骤一中，所述外植体花药的准备包括：

(1)选取生长至适宜时期的百脉根花序装于塑料袋内置于冰箱进行低温预处理；

(2)对低温处理后的百脉根花序置于无菌操作台中进行消毒，用滤纸吸干表面水分后，剥取花药。

进一步，所述百脉根花序为经显微镜镜检，选取小孢子处于单核中期或单核靠边期的百脉根花序。

进一步，所述将花序置于冰箱进行低温预处理包括：将花药放置于3-5℃的冰箱处理6-12小时。

进一步，所述花序的消毒处理包括：

首先，将花序经流水冲洗20-30min后，于无菌操作台中用无菌水冲洗3-5遍；

其次，采用70％-75％的乙醇消毒15-20s，无菌水冲洗3-5遍，重复1次；

最后，用添加有0.5-1.0％Tween的0.1％的升汞消毒60-120s，用无菌水再冲洗5-8遍。

进一步，步骤一中，所述将外植体花药置于诱导组织培养基上进行培养，得到愈伤组织包括：

将花药外植体置于45mg/L的BA溶液中浸泡8-15min，在光照强度为1500～2000lx，光照时间为8～12小时/天，温度为20～28℃条件下，培养10～20天，取出，放入诱导培养基上，反复培养至花药上长出愈伤组织。