[发明专利]一种新型组成型启动子、重组地衣芽孢杆菌及其应用

权利要求书

1.一种新型组成型启动子P2，其特征在于，所述组成型启动子P2来源于保藏编号为Bacillus licheniformis ATCC14580，Bacillus licheniformis ATCC12759，Bacilluslicheniformis ATCC9945，Bacillus licheniformis ATCC13438或Bacilluslicheniformis ATCC9259的地衣芽孢杆菌中。

2.根据权利要求1中所述组成型启动子，其特征在于，所述新型组成型启动子P2的核苷酸序列见SEQ ID NO:1。

3.一种重组地衣芽孢杆菌，其特征在于，所述重组地衣芽孢杆菌启动子为权利要求1中所述的组成型启动子P2，且所述重组地衣芽孢杆菌含有麦芽三糖淀粉酶基因片段。

4.根据权利要求3所述的重组地衣芽孢杆菌，其特征在于，所述重组地衣芽孢杆菌的重组表达载体为pHY-P2-tfa。

5.根据权利要求4所述的重组地衣芽孢杆菌，其特征在于，所述pHY-P2-tfa是通过将权利要求1中所述新型组成型启动子P2克隆到pHY300-PLK质粒，并将权利要求3中所述麦芽三糖淀粉酶基因片段克隆到上述所得质粒中得到。

6.一种如权利要求3所述的重组地衣芽孢杆菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法为：

将地衣芽孢杆菌中提取得新型组成型启动子P2基因克隆到pHY300-PLK质粒上，并将麦芽三糖淀粉酶基因片段克隆到重组表达载体pHY-P2-tfa上，最后转入地衣芽孢杆菌中得到重组地衣芽孢杆菌。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌保藏编号为Bacillus licheniformis ATCC14580,Bacillus licheniformis ATCC12759,Bacilluslicheniformis ATCC9945,Bacillus licheniformis ATCC13438或Bacilluslicheniformis ATCC9259中得至少一种。

8.一种如权利要求3所述的重组地衣芽孢杆菌应用，其特征在于，用于发酵生产麦芽三糖淀粉酶。

9.一种如权利要求8所述的重组地衣芽孢杆菌生产麦芽三糖淀粉酶的方法，其特征在于，发酵培养基为：20g/L蛋白胨FP321，10g/L酵母粉FM408，5g/L玉米浆干粉，70-90g/L碳源，9.12g/L K₂HPO₄·3H₂O，1.36g/L KH₂PO₄，0.50g/L CaCl₂，0.50g/L MgSO₄·7H₂O，10g/L(NH₄)₂HPO₄；发酵温度为25-42℃，发酵时间12-72h。

10.根据权利要求9中所述的重组地衣芽孢杆菌生产麦芽三糖淀粉酶的方法，其特征在于，所述碳源为葡萄糖、蔗糖、木糖或麦芽糊精中的至少一种。