[发明专利]新型冠状病毒2019-nCoVORF1ab、N、E基因检测试剂盒及制备、检测方法

说明书

本发明公开了一种新型冠状病毒2019‑nCoVORF1ab、N、E基因检测试剂盒及其制备、检测方法，包括：特异性引物2019‑nCoV‑1ab‑F、nCoV‑1ab‑R、探针CoV‑1ab‑P；特异性引物2019‑nCoV‑N‑F、nCoV‑N‑R、探针nCoV‑N‑P；特异性引物2019‑nCoV‑E‑F、nCoV‑E‑R、探针nCoV‑E‑P；本发明针对2019‑nCoV的三个保守基因（1ab、N和E基因）设计多靶点荧光PCR检测引物，是一种更加准确、简便、快速的诊断试剂，在流行病学调查应用方面具有极大优势，有利于疫病防控，从而进行早期治疗，以免造成更大的经济损失。

技术领域

本发明涉及一种新型冠状病毒荧光PCR检测法，具体地说，涉及一种新型冠状病毒2019-nCoVORF1ab、N、E基因检测试剂盒及其制备、检测方法，属于生物工程技术领域。

背景技术

新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19)是由冠状病毒2019-nCoV引起的人的一种传染病，主要症状为发热、乏力、咳嗽、呼吸不畅， 在较严重病例中，可导致严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。主要传播方 式为飞沫传播和接触传播，任何年龄段均易感。由于尚无有效的疫苗防治，所以建立一种快速、准确的检测方法就显得尤为重要。

TaqMan荧光探针是一种寡核苷酸探针，其5’末端携带荧光基团，如FAM、TET、VIC、HEX等，3’端携带淬灭基团，如TAMRA、BHQ等。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。TaqMan方法优点是特异性高，重复性好，但价格高，只适合特定目标。TaqMan探针法荧光定量PCR适用于病原体检测，疾病耐药基因研究，药物疗效考核，遗传疾病的诊断。

当前，国内外有多个单位针对2019-nCoV开发了荧光PCR试剂盒，但这些试剂盒大多数是仅针对一个、二个基因进行检测，可能会存在假阴性，不利于疫情监控。

基于此，本发明依据《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案》选取2019-nCoV 保守的ORF1ab、N和E基因作为靶基因，设计特异性引物及探针建立2019-nCoV特异的荧光型PCR检测方法。本发明的新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸恒温荧光检测试剂盒在整个检测过程中，从DNA提取到出现检测结果，则只需约5H，大大减少手工操作和缩短时间。且本发明一次可检测多个样品，特别适合于大批样品的检测。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种新型冠状病毒2019-nCoVORF1ab、N、E基因检测试剂盒及其制备、检测方法，实现2019-nCoV的快速检测，本发明在检测2019-nCoV的整个过程中，从DNA提取到出现检测结果，只需约3h，大大缩短检测时间，提高检测效率。

为实现上述目的，本发明提供一种新型冠状病毒2019-nCoVORF1ab、N、E基因检测试剂盒及其制备、检测方法，

技术方案如下：

这种新型冠状病毒2019-nCoVORF1ab、N、E基因检测试剂盒，包括：特异性引物2019-nCoV-1ab-F、2019-nCoV-1ab-R、探针2019-nCoV-1ab-P；特异性引物2019-nCoV-N-F、2019-nCoV-N-R、探针2019-nCoV-N-P；特异性引物2019-nCoV-E-F、2019-nCoV-E-R、探针2019-nCoV-E-P；探针标记的报告荧光染料分别为FAM、VIC和NED，标记的荧光淬灭基团均为BHQ；其中特异性引物和探针序列如下：

①2019-nCoV-1ab-F:5′- CCACATATATCACGTCAAC-3′；

2019-nCoV-1ab-R:5′- GTCACAATTACCTTCATCA-3′；