[发明专利]一种蝴蝶兰花底色SNP分子标记引物组合物及其应用

权利要求书

1.一种检测蝴蝶兰花底色SNP分子标记Marker35886和Marker70907的引物组合物在蝴蝶兰花底色鉴定或种质资源鉴定中的应用，其特征在于：所述的Marker35886的扩增序列为SEQ ID NO:7所示的序列，所述的Marker35886的碱基位置为所述扩增序列的第60位碱基；所述的Marker70907的扩增序列为SEQ ID NO:8所示的序列，所述的Marker70907的碱基位置为所述扩增序列的第147位碱基。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的引物组合物包括：

（1）SNP分子标记Marker35886的预扩增引物：

SEQ ID NO:1：Marker35886-F：5'-ACATGCGACGTCGAGATACC-3'；

SEQ ID NO:2：Marker35886-R：5'-GAATCCAAACTGGCGCTG-3'；

（2）SNP分子标记Marker70907的预扩增引物：

SEQ ID NO:3：Marker70907-F：5'-GATAAAATTTTTAACATTATGGTTTAG-3'；

SEQ ID NO:4：Marker70907-R：5'-TAACCATGAAATTGCTCCATC-3'。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的引物组合物还包括：

（1）SNP分子标记Marker35886的延伸引物：

SEQ ID NO:5：Marker35886-F2：5'-tttttttttttttttttttttttttttttttttttttGGGTGCATTTGTAGAATGCC-3'；

（2）SNP分子标记Marker70907的延伸引物：

SEQ ID NO:6：Marker70907-F2：5'-ttttttttttttttttttttttttttttttttAACGATTTGTCCTCACTCATTTT-3'。

4.一种权利要求1所述的SNP分子标记Marker35886和Marker70907的筛选方法，其特征在于：所述的方法包括以下步骤：以蝴蝶兰黄色底色DNA混池和白色底色DNA混池为模板，以水稻基因组作为参考，利用酶切反应预测软件进行系统分析，根据其重复序列、GC含量和基因特点采用双酶切对样本基因组DNA分别进行酶切，得到的酶切片段进行3’端加A处理、连接Dual-index测序接头、PCR扩增、纯化、混样、切胶选取目的片段，文库质检合格后进行测序，对测序得到的各样品的reads数据进行评估，通过reads间聚类的方法，在亲本和混池中开发SNP分子标记。