[发明专利]一种新型氨肽酶及其可溶性表达方法

说明书

本发明提供一种氨肽酶O及其可溶性表达方法，所述的氨肽酶O，其氨基酸序列为SEQ OD NO:1；其编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:2。本发明实现了氨肽酶O在大肠杆菌中的可溶性表达，从而能够促进氨肽酶O在产业上的应用。相对于真核表达体系，大肠杆菌是一种常见的原核体外重组表达体系，其具有发酵周期短，生产制备成本低等优势；而且可溶性表达有活性的氨肽酶可以有效的避免因包涵体复性带来活性损失和复杂的包涵体复性步骤，从而降低酶的制备成本。

技术领域

本发明属于蛋白酶筛选及重组表达技术领域，具体涉及一种氨肽酶及其可溶性表达方法。

背景技术

氨肽酶是一类能从蛋白质和多肽N端选择性切除氨基酸残基产生游离氨基酸的外切蛋白酶。氨肽酶在食品工业和制药工业有广泛应用，在食品工业中氨肽酶被用来进行食物脱苦，改善食品风味，也可以与其他蛋白酶一起作为蛋白测序的工具酶。基于常用的MEROPS数据库(https://www.ebi.ac.uk/merops/)的经典分类方法，以氨肽酶活性位点对抑制剂的敏感性，氨肽酶包含有丝氨酸氨肽酶，半胱氨酸氨肽酶以及金属氨肽酶等家族。众所周知，蛋白的活性位点决定了其催化底物的特异性，所以迫切需要开发具有不同底物结合活性位点的氨肽酶，以获得具有不同降解特性的氨肽酶来满足应用需求。

在金属氨肽酶M1家族中，氨肽酶O(Aminopeptidase O,AMPO)是一类未表征过的新型的氨肽酶。与氨肽酶O最相似的两个家族分别为氨肽酶B(Aminopeptidase B，APB)和白三烯A4水解酶(Leukotriene A-4hydrolase，LTA4H)，相似度分别为23.5％和20％。以上氨肽酶都包含三个结构域，分别为M1的N端结构域(具有引导折叠的功能)，M1结构域(催化域)和白三烯水解结构域。催化域包括HEXXHX18E和GXMENX保守模块；在其他金属氨肽酶中，HEXXHX18E在金属氨肽酶上被证明为锌离子的结合域。其中的两个组氨酸和后面的谷氨酸被认为与锌离子直接发生相互作用，前面的谷氨酸是酸碱催化的活性中心；在氨肽酶O中被认为参与底物结合和与底物稳定有关系的保守序列变为LGMASP，除了蛋氨酸具有保守性，其他氨基酸残基有明显的差异(图1)，提示对底物特异性和底物与酶的结合状态有影响。

但迄今为氨肽酶O还不能在大肠杆菌中进行可溶性表达，这大大限制了其在产业的应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种氨肽酶O及其可溶性表达方法，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种氨肽酶O，其氨基酸序列为：