[发明专利]一种间充质干细胞的分离及扩增方法

权利要求书

1.一种间充质干细胞的分离及扩增方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、确定实验人员；

步骤二、确定实验器材和试剂；

步骤三、确定实验方法；

步骤四、进行间充质干细胞分离；

步骤五、进行间充质干细胞体外扩增，细胞镜下观察生长且密度达70-80%时，即可进行传代操作。

2.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞的分离及扩增方法，其特征在于：所述步骤二中，实验器材包括以下：

流式细胞仪、CO2培养箱、台式离心机、生物安全柜、显微镜、程序降温仪、酶标仪间充质干细胞无血清条件培养基。

3.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞的分离及扩增方法，其特征在于：所述步骤三中，采用贴壁法进行间充质干细胞的分离。

4.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞的分离及扩增方法，其特征在于：所述步骤四中，间充质干细胞的分离包括以下过程：

（1）、在超净台内将脐带用无菌生理盐水冲洗干净；

（2）、将洗净的脐带剪成小于 1mm3的组织块碎后放入离心管中，将组织块平铺于10个T75培养瓶底部，加入含无血清培养基，置于37℃、含5%二氧化碳饱和湿度的恒温培养箱中；

（3）、6天后培养液全量换液一次，镜下观察是否有细胞从组织块周围爬出，以后每3天换液一次，直至可见细胞爬出且密度达70-80%,可以考虑进行传代操作。

5.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞的分离及扩增方法，其特征在于：所述步骤五中，进行间充质干细胞体外扩增包括以下过程：

（1）、轻轻拍打培养瓶侧壁，使组织块完全脱落下来；

（2）、将含有组织块的培养上清液弃掉，用 PBS 冲洗培养瓶底部，PBS 清洗2次，加入1mL 预热的0.05%胰酶；

（3）、用显微镜进行观察，待显微镜下细胞变圆后，用旧培养液终止消化，轻轻吹打，吸取细胞悬液于离心管中，1500rpm/min，4℃离心5min，收集细胞，并计数，以5×103/cm2的接种密度进行传代。