[发明专利]猪α环形转录本αCT基因及应用

说明书

本发明公开猪α环形转录本αCT基因及应用，其序列为SEQ ID No.11。本发明所述的检测方法是将从将待检猪的淋巴组织样品中提取RNA反转录，再以所得到的cDNA为待检模板，用本发明公开的引物序列SEQ ID No.1至SEQ IDNo.7进行扩增，根据扩增产物的核酸电泳图中是否出现特定条带对照DNA分子量标准确定待检猪待检IgA⁺B细胞类别转换重组情况。本发明可在制备用于评价猪IgA黏膜免疫活化情况的试剂中的应用。

技术领域

本发明涉及一种猪IgA⁺B细胞类别转换重组的标志物序列，以及猪IgA⁺B细胞类别转换重组的检测方法。

背景技术

IgA⁺B细胞类别转换重组三种关键产物是指B细胞在IgA类别转换重组过程中所产生的转录产物：α胚系转录本(αgerm-line transcripts,αGLT)，即IαCα；IgA类别转换后转录本α(Post-switchtranscriptsα,PSTα)，即IμCα和α环形转录本(αcircle transcripts,αCT)，即IαCμ。

黏膜免疫应答，尤其是分泌型免疫球蛋白A(sIgA)对于抵抗病原感染，维持机体健康及微生态平衡具有至关重要的作用。肠道黏膜是人和动物体最大的黏膜组织，肠道派伊尔集合淋巴结(Peyer’s patches,PP结)是由小肠黏膜淋巴组织有序集合而成，是肠道黏膜免疫发生及IgA抗体产生的主要部位。肠系膜淋巴结(MLN)也是肠道重要的免疫组织，对于维持肠道免疫应答有重要作用。

B细胞经抗原刺激后，需要经过抗体类别转换重组(CSR)和亲和力成熟(SHM)两个重要过程才能形成高亲和力IgA⁺B细胞。在IgA类别转换重组(IgA CSR)过程中，编码免疫球蛋白(Ig)的重链恒定区的外显子由编码IgM的Cμ转变为编码IgA的Cα，而结合抗原的可变区保持恒定。IgA抗体类别转换重组起始于一种可诱导的非编码α胚系转录本(αGLT)-IαCα的产生，在细胞内高表达的激活诱导的胞苷脱氨酶(AICDA,AID)的作用下，基因组Sμ和Sα转换区DNA分别双股断裂，经过断端修复与连接，使原来间隔于Sμ和Sα的DNA序列被切除，形成一个环形产物，由于其上面有启动子(Iα)，在降解前短暂编码α环形转录本(αCT)-IαCμ；而两个远端转换区序列连接在一起，形成最终的转换重组产物，编码IgA类别转换后转录本α(PSTα)-IμCα，使B细胞由起初表达的IgM抗体变为表达IgA抗体。这个过程中，αGLT、PSTα，尤其是αCT是体内外类别转换重组的最直接证据。

目前，黏膜免疫研究多以小鼠为模型，这三种转录产物早已成熟应用于体内外评价IgA⁺B细胞类别转换重组。但是，猪的黏膜免疫研究甚少，猪IgA⁺B细胞类别转换重组的研究目前仍为空白，研究工具的匮乏很大程度上阻碍了猪黏膜免疫学发展。猪不仅是一种重要的经济动物；也能够作为大动物模型，弥补传统实验动物模型如小鼠、大鼠和兔等小动物的不足，应用于科学研究中。发展和完善研究工具、研究方法对于猪黏膜免疫学的发展进步至关重要。猪αGLT、PSTα，尤其是αCT的检测作为体内外IgA⁺B细胞类别转换重组的最直接证据，对于评价猪黏膜免疫应答具有十分重要意义。该方法可用作病原感染、疫苗免疫和各类因子、佐剂对IgA⁺B细胞分化和黏膜免疫应答活化情况的评价指标。为发掘和选择有效的黏膜免疫佐剂、疫苗和免疫策略提供依据。

发明目的

本发明提供一种可作为检测猪IgA黏膜免疫应答活化情况的标志物，以及检测的方法和可能的用途。

本发明的猪IgA黏膜免疫应答活化情况的标志物为：

1)猪α胚系转录本αGLT，其基因序列为SEQ ID No.8；

2)猪IgA类别转换后转录本α短序列PSTα-1，其基因序列为SEQ ID No.9；