[发明专利]他克莫司软膏透皮试验检测方法

说明书

本发明提供一种检测他克莫司软膏透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量的样品的前处理方法，包括下列步骤：选择乙醇水溶液作为透皮介质进行透皮试验；进行皮面、皮内残留药物的样品前处理：包括有机溶剂冲洗、加热至熔融/乳化均质粉碎、超声提取、离心得提取液，然后将提取液转移定容，过滤，加入内标制得待测溶液。还提供一种液‑质联用快速检测低浓度他克莫司的方法，采用超高效液相色谱—三重四级杆质谱联用仪，对他克莫司软膏透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量进行检测。本发明用于检测皮上、皮内、透皮的样品中含有的他克莫司，干扰性小、检出限低、灵敏度高、重现性好。

技术领域

本发明属于药品检测技术领域，具体涉及一种检测他克莫司软膏透皮吸收的方法。

背景技术

他克莫司(Tacrolimus)为强效大环内酯类免疫抑制药，可用于治疗肝脏、心脏、肾脏、肺移植等初期的免疫抑制及控制移植物的排异反应，并已试用于治疗少数患有难治性自身免疫病或免疫系统介导疾病的患者。他克莫司软膏是全球首个获批的非皮质类固醇类外用免疫调节剂，适用于因潜在危险而不宜使用激素治疗、或对激素治疗疗效欠佳、无法耐受的中至重度特异性皮炎的患者，可避免其口服制剂全身吸收副作用大，局部作用效率低，个体差异较大的缺陷。

经皮渗透给药制剂的体外透皮吸收研究，多采用Franz扩散池法，用离体小型乳猪的皮肤模拟人体皮肤，通过检测接收介质中药物的透过量，皮内药物滞留量与皮表面的残留药物量，考察药物的分布情况，全面评价供试制剂与参比制剂透皮吸收程度的差异。接受介质应具有接受透皮药物的能力，并尽可能符合类似体内的漏槽条件，但他克莫司在水中不溶，常用的接受液生理盐水和等渗的磷酸盐缓冲液等达不到溶解要求。添加常规的表面活性剂通常对他克莫司检测带来干扰，有机溶剂会影响皮肤的通透性，因此筛选出既可达到漏槽条件溶解经皮透过药物，又能对微量药物的定量分析无干扰的接受介质非常关键。

市售他克莫司软膏浓度仅0.1％，经皮渗透后皮肤各部分的药物含量很小，且软膏中含有大量的油脂性的半固体基质，动物皮肤中含有蛋白质和脂质等大量的生物大分子，药物经皮渗透后，需要对皮表、皮内及透过药物进行提取分离，排除干扰，常规的液相方法很难准确检测，需要建立一种ng级定量检测方法。而皮内滞留药物的样品处理，文献报道透皮试验皮内滞留量的样品处理方法一般是将皮肤剪碎，置于研钵中研碎(不同人研磨力度程度可能不同)，此方法存在操作繁琐，破碎不完全，回收率低，重复性差等缺点，需要建立一种人为干扰小，药物提取完全的皮肤处理方法。

发明内容

本发明所要解决的问题在于提供一种他克莫司软膏透皮渗透试验的接收介质。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种他克莫司软膏透皮试验中皮面残留量、皮内滞留量及皮肤透过量检测时，采用的样品前处理方法。

本发明所要解决的第三个技术问题在于提供一种能够快速检测透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量的方法。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供一种他克莫司软膏透皮试验接收介质。发现乙醇水溶液作为透皮试验接收介质能很好克服检测干扰，经严格的漏槽条件计算，优选为20-30％的乙醇溶液，更优选为25％乙醇溶液。

还提供一种检测透皮试验中他克莫司的皮面残留量、皮内滞留量、皮肤透过量的样品前处理方法：取他克莫司软膏适量均匀涂布于皮肤上，在接收池中加入接收介质，使皮肤与接收介质的液面接触，使药物释放到接收介质，得接收液，然后分别采取下列步骤：

(1)皮面残留样品处理：取下渗透试验的整块皮肤，刮去表面残留药膏并置洁净离心管中，用溶剂冲洗皮肤表面，加热熔融，超声，离心，取上清液加入溶剂定容，过滤，加入内标溶液混匀，得皮面残留量待测溶液。