[发明专利]一种仿生细胞膜纳米粒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种仿生细胞膜纳米粒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）在肿瘤细胞膜囊泡中，加入MnO₂纳米粒，使用微型挤出器通过聚碳酸酯多孔膜进行共挤出，聚碳酸酯多孔膜孔径为50nm、100nm、200nm或400nm，制得包载MnO₂纳米粒的肿瘤细胞膜囊泡；

（2）将光热剂或光敏剂溶解于有机溶剂中，有机溶剂为乙醇、二甲基亚砜或二甲基甲酰胺，光热剂溶液或光敏剂溶液的浓度为0.5~10mg/mL；

（3）在步骤（1）中制得的包载MnO₂纳米粒的肿瘤细胞膜囊泡溶液中滴加入步骤（2）中得到的溶液，并于37℃下孵育20分钟，之后通过离心除去游离的光热剂或光敏剂，最终获得仿生细胞膜纳米粒制剂。

2.根据权利要求1所述的仿生细胞膜纳米粒的制备方法，其特征在于：所述肿瘤细胞膜囊泡的制备方法，包括以下步骤：

（1）从肿瘤细胞中提取肿瘤细胞膜，收集肿瘤细胞并将其悬浮于低渗裂解缓冲液中，使用超声波破碎机进行超声破碎处理，之后使用离心机进行差速离心，从而在上清液中获取肿瘤细胞膜；

其中：肿瘤细胞密度为1000~20000个/10mL低渗裂解缓冲液；超声波破碎机功率的50~90%，时间为10~60分钟，超声时长为0.1~2s，时间间隔为0.5~5s；差速离心法首先以5000~20000g的转速离心10~40分钟，再以100000~200000g的转速离心20~60分钟；

（2）将步骤（1）中得到的肿瘤细胞膜进行洗涤纯化，使用离心机对肿瘤细胞膜进行离心，弃上清得到肿瘤细胞膜沉淀，使用肿瘤细胞膜洗涤液对肿瘤细胞膜沉淀进行吹打重悬，重复3次，得到纯化的肿瘤细胞膜；

其中：离心转速为100000~200000g，时间为20~60分钟；

（3）为了获得肿瘤细胞膜囊泡，使用超声波发生器对步骤（2）中获得的肿瘤细胞膜进行超声波处理，之后使用微型挤出器通过聚碳酸酯多孔膜进行挤出，从而获得肿瘤细胞膜囊泡；

其中：超声波发生器功率为1~20W，时间为10~30分钟；聚碳酸酯多孔膜孔径为50nm、100nm、200nm或400nm。

3.根据权利要求2所述的仿生细胞膜纳米粒的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的低渗裂解缓冲液，包括氯化钾、氯化镁、蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂以及Tris-盐酸缓冲液；步骤（2）中的肿瘤细胞膜洗涤液为含乙二胺四乙酸的Tris-盐酸缓冲液；步骤（3）中挤出步骤所使用的溶液为PBS溶液、Hanks溶液或生理盐水。

4.根据权利要求3所述的仿生细胞膜纳米粒的制备方法，其特征在于：氯化钾的浓度为5~10mM；氯化镁的浓度为1~5mM；Tris-盐酸缓冲液的浓度为10~30mM，pH为7.0~8.0；乙二胺四乙酸的浓度为0.1~0.5mM。

5.根据权利要求2所述的仿生细胞膜纳米粒的制备方法，其特征在于：所述肿瘤细胞膜囊泡采用B16-F10鼠黑色素瘤细胞的细胞膜或4T1-luc鼠乳腺癌细胞的细胞膜制成。

6.根据权利要求1所述的仿生细胞膜纳米粒的制备方法，其特征在于：所述光热剂为二烷基碳菁染料DiR。

7.根据权利要求6所述的仿生细胞膜纳米粒的制备方法，其特征在于：所述光热剂DiR负载在肿瘤细胞膜囊泡磷脂双分子层中。

8.根据权利要求1所述的仿生细胞膜纳米粒的制备方法，其特征在于：所述光敏剂选自焦叶绿酸己醚、5-氨基酮戊酸或二氢卟吩e6。

9.根据权利要求1所述的仿生细胞膜纳米粒的制备方法，其特征在于：肿瘤细胞膜囊泡：MnO₂纳米粒：光热剂或光敏剂的质量比为：1：1~10000：1~50000。

10.根据权利要求1所述的仿生细胞膜纳米粒的制备方法，其特征在于：所述仿生细胞膜纳米粒的粒径为20~500nm。