[发明专利]一种天然抗氧化活性物质的提取与检测方法

权利要求书

1.一种天然抗氧化活性物质的提取与检测方法，其包括如下步骤：

步骤一、抗氧化活性成分提取；

步骤二、将步骤一得到的样品提取液采用HPLC进行检测，检测条件如下：

色谱柱为Dikma ODS C₁₈色谱柱；

柱温30-40℃；

流动相：流动相A为0.02%-0.05%乙酸铵，其中流动相A中含有0.1%-0.2%BHT，流动相B为乙腈；

洗脱方式为梯度洗脱；

所述样品选自如下物质中的一种：

食品：番茄、胡萝卜、草莓、苹果、洋葱、黄瓜、蛋黄、南瓜、芹菜、西蓝花、莴笋、豇豆；

中药材：山楂、枸杞，红花、陈皮、金银花、桑叶、槐米、垂盆草、侧柏叶、金钱草、槐花、山奈、盐杜仲、地锦草、枳椇子、蒲黄、怀菊花、蜂花粉；

所述抗氧活性物质为β-胡萝卜素、番茄红素、叶黄素、玉米黄素、角黄素、漆黄素、藏红花素、山奈酚、圣草酚、橙皮素、木犀草素、芹菜素、金合欢素、二氢杨梅素、杨梅素、槲皮素、异鼠李素和异槲皮素；

所述的食品的抗氧化活性成分的提取包括以下步骤：

（1）取样品打浆均质，加入抗氧化剂，加入丙酮-乙酸乙酯-石油醚混合溶剂，60℃-80℃避光恒温振荡提取30-40 min，30-45℃避光恒温超声提取40-50 min；

（2）先加入氯化钠分层，后加入硫酸镁吸水，二者质量比1:2；

（3）使用高速离心机3000-4000rpm离心5-10min，提取上层有机相；

（4）30℃-45℃氮吹浓缩，乙腈定容，过0.22μm滤膜进样；

所述的中药材的抗氧化活性成分的提取包括以下步骤：

（1）取中药材样品于60-80℃真空干燥4-6h，晾干后粉碎，过0.2-0.5 mm筛；

（2）样品中加入体积分数为60%-80%乙醇与水的混合溶剂，室温浸泡60 min，40℃恒温振荡提取40 min，45℃恒温超声提取40 min；

（3）加入含有氯化钠，硫酸钠，硫酸镁质量比1:2:2的萃取盐析包于提取管中，震荡涡旋1-2 min，4000 rpm 离心6 min，提取上层有机相；

（4）将有机相加入到PSA吸附净化剂于萃取管中，涡旋1-2 min，充分分散并吸附色素和杂质，6000 rpm离心10 min，过0. 22 μm有机相滤膜。

2.根据权利要求1所述的天然抗氧化活性物质的提取与检测方法，步骤二中梯度洗脱的程序为：流动相A/B，0-5min：A/B=5%/95%；5-10min：A/B=10%/90%；10-20min：A/B=30%/70%；20-30min：A/B=50%/50%；30-40min：A/B=80%/20%；40-50min：A/B=5%/95%。

3.根据权利要求1所述的天然抗氧化活性物质的提取与检测方法，所述食品的抗氧化活性成分的提取的步骤（1）中均质后加入相当于样品重量1%-3%的抗氧化剂。

4.根据权利要求1所述的天然抗氧化活性物质的提取与检测方法，所述食品的抗氧化活性成分的提取的步骤（1）的丙酮-乙酸乙酯-石油醚的体积比为1:3:1-1:4:2。

5.根据权利要求1所述的天然抗氧化活性物质的提取与检测方法，所述步骤二还包括标准曲线建立步骤，其包括系列混合标准溶液的配制步骤，所述系列混合标准溶液的质量浓度为0.5-50μg/mL。