[发明专利]一种固相萃取包及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种固相萃取剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）取碳水化合物溶于水，置于反应釜中控温160-180℃反应4-10h，降温至60-80℃反应3-5h，将所得液体离心、洗涤，循环3次，洗涤剂为水和乙醇，反复洗涤得到粒径大小可控的碳微球；

2）将步骤1）所得碳微球置于丙烯酸溶液中，超声分散5-10min，60-80℃水浴加热1-2小时，常温干燥得到改性碳微球；

3）将步骤2）所得改性碳微球置于高氯酸水溶液中，超声分散均匀，加入苯胺，在冰浴条件下搅拌10-20min，逐滴加入过硫酸铵引发剂，继续冰浴搅拌8-12h，反应完成后，产物依次用无水乙醇和二次去离子水反复离心洗涤，烘干即得聚苯胺@碳微球；

步骤1）中所述碳水化合物为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、淀粉、纤维素、糖原中的一种或几种；所述碳水化合物与水的质量体积比为1-2g：8-10mL；

步骤2）中所述丙烯酸溶液的质量浓度为2%-5%；所述碳微球与丙烯酸溶液的质量体积比为1-2g：10-20mL；

步骤3）中所述高氯酸水溶液的摩尔浓度为0.8-1.5mol/L；所述改性碳微球与高氯酸水溶液的质量体积比为1-2g：10-14mL。

2.由权利要求1所述制备方法制得固相萃取剂与萃取盐析包组成的固相萃取包在中药材真菌毒素分析检测中的应用，其特征在于，所述的真菌毒素检测采用液相色谱-质谱法进行检测，EIS-负离子模式：液相柱为Agilent Poroshell 120 EC C₁₈色谱柱，流动相0.1%氨水-乙腈；EIS-负离子模式梯度洗脱程序为：流动相A/B，0-0.5min：A/B=95%/5%；0.5-1.0min：A/B=80%/20%；1.0-3.0min：A/B=30%/70%；3.0-4.0min：A/B=5%/95%；4.0-6.0min：A/B=95%/5%；

EIS+正离子模式：液相柱为Agilent Poroshell 120 EC C18色谱柱，流动相0.1%甲酸-乙腈； EIS+正离子模式梯度洗脱程序为：流动相A/B，0-0.8min：A/B=90%/10%；0.8-2.5min：A/B=72%/28%；2.5-11.5min：A/B=32%/68%；11.5-13.0min：A/B=0%/100%；13.0-15.0min：A/B=90%/10%；

所述萃取盐析包中氯化钠、无水硫酸钠和硫酸铵的质量比为1:3-4:2-3；

所述真菌毒素选自玉米赤霉烯酮、雪腐镰刀菌烯醇、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、赭曲霉毒素A、T-2毒素、HT-2毒素，伏马毒素B₁、伏马毒素B₂、伏马毒素B₃、黄曲霉毒素B₁、黄曲霉毒素B₂、黄曲霉毒素G₁、黄曲霉毒素G₂、杂色曲霉素中的一种或几种。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1）样品前处理：将中药材样品真空干燥后粉碎，粉末过筛，四分法缩分得到均质样品；所得均质样品加入萃取剂，涡旋混匀，室温浸泡，振荡提取后恒温超声提取，调节pH；利用萃取盐析包提取上层有机相；将前述有机相加入同位素内标溶液，加入固相萃取剂处理，过有机相滤膜，得待测液；

2）利用同位素内标-液相色谱串联质谱法检测步骤1）所得待测液中的真菌毒素。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述真空干燥温度设置为60-80℃、时间设置为4-6h，筛孔直径为0.2-0.5mm，pH值设定为5.5-6.0；所述样品、萃取盐析包的质量比为1:0.6-1。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述中药材选自生建曲、西洋参、天麻、党参、黄芪、当归、百合、麦冬、川贝、白芍、重楼、甘草、柴胡、制何首乌、制川乌、葛根、地黄、生半夏、赤芍、白术、山药、山奈、苦杏仁、枸杞子、五倍子、薏苡仁、预知子、山楂、芡实、菟丝子、五味子、牛蒡子、盐补骨脂、苘麻子、桑椹、沙苑子、蛇床子、槐米、枳椇子、红花、金银花、杜仲、黄柏、陈皮、白本耳、土茯苓中的至少一种。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：步骤1）中，对于浅色中药材应用时，萃取盐析包中氯化钠、无水硫酸钠和硫酸铵的质量比为1:3-4:2-3，固相萃取剂与所述上层有机相的质量体积比为0.1-0.2:2g/mL；对于深色中药材应用时，萃取盐析包中氯化钠、无水硫酸钠和硫酸铵的质量比为1:2-3:3-4，固相萃取剂与所述上层有机相的质量体积比为0.2-0.25:2g/mL；所述浅色中药材选自百合、川贝、天麻、麦冬、白芍、薏苡仁、苦杏仁、白本耳、葛根、生半夏、山药、山奈、山楂、芡实中的至少一种，深色中药材选自生建曲、西洋参、党参、黄芪、当归、重楼、甘草、柴胡、制何首乌、制川乌、地黄、赤芍、白术、枸杞子、五倍子、预知子、菟丝子、五味子、牛蒡子、盐补骨脂、苘麻子、桑椹、沙苑子、蛇床子、槐米、枳椇子、金银花、红花、杜仲、陈皮、黄柏、土茯苓中的至少一种。