[发明专利]用于实现LP基因启动子区甲基化程度检测的特异性引物及其应用

说明书

本发明公开了一种用于实现LP基因启动子PCR扩增的特异性引物，包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列为：SEQ ID NO.1，所述下游引物的核苷酸序列为：SEQID NO.2；特异性引物实现LP基因启动子PCR扩增后，检测LP基因启动子在第65bp与105bp处的CpG2、6位点的甲基化程度。本发明可以为设计预测精神分裂症患者入睡潜伏期延长的药物、试剂和方法提供参考，从而为完善精神分裂症诊疗方案提供技术支持，并使得以LP基因启动子区甲基化作为靶点的药物有望成为干预精神分裂症患者入睡潜伏期延长的一种新手段。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，特别是指一种用于实现LP基因启动子在第65bp与105bp处的CpG2、6位点的甲基化程度检测的特异性引物在制备预测精神分裂症患者入睡潜伏期延长的药物中的应用。

背景技术

精神分裂症(SCZ)是最常见的精神障碍，而睡眠障碍是精神分裂症的重要诊断标准之一，也是精神疾病发生的预测信号。睡眠障碍是难治性精神分裂症复发的危险因素，与患者的低生命质量、社会功能缺陷、心血管疾病和高自杀率相关，其发生率为72.4％。

失眠是精神分裂症常见睡眠障碍，包括入睡潜伏期(SOL)延长、夜间觉醒增多、多梦、睡眠感缺乏与早醒等，其中入睡潜伏期延长是精神分裂症特异性的睡眠障碍。多导睡眠图是目前临床上检测各种睡眠障碍的标准方法，包括失眠和入睡潜伏期延长，但临床上尚缺乏预测精神分裂症患者出现入睡潜伏期延长的方法。因此，建立预测精神分裂症患者入睡潜伏期延长的技术方法，对精神分裂症的诊疗有重大意义。

瘦素(Leptin，简称LP)是一种由脂肪组织分泌的激素，它在血清中的含量与动物脂肪组织大小成正比。瘦素作用于位于中枢神经系统的受体(Leptin Receptor)，从而调控生物的行为以及新陈代谢。

目前，对LP的相关研究已广泛存在，并关联到多个方面，例如，文献《In VivoMethylation Patterns of the Leptin Promoter in Human and Mouse》(2006年)指出：LP基因启动子的甲基化通常被强加在合子发育后，这种表现基因型标记可能在调节一种重要的代谢基因的表达上有作用。文献《瘦素基因启动子区-2548G/A多态性与非酒精性脂肪肝的相关分析》(2006 年)指出：血清瘦素水平可作为评价肝功能的临床指标之一，瘦素基因-2548G/A等位基因变异情况可应用于对非酒精性脂肪肝病的预测性分析中。文献《瘦素基因甲基化水平与妊娠期糖尿病的相关性》(2017年)指出：瘦素基因启动子区甲基化动态变化过程与妊娠期糖尿病的发病有一定相关性。文献《饮食诱导肥胖小鼠瘦素及瘦素受体基因启动子甲基化探讨》(2010 年)指出：瘦素基因及瘦素受体基因启动子区CpG位点甲基化可能与饮食诱导肥胖小鼠瘦素抵抗无关。文献《瘦素启动子甲基化在骨关节炎发病中的作用》(2011年)指出：瘦素启动子区域部分位点的去甲基化可能是骨关节炎(OA)发生的始动因素之一，为研究OA的致病机制及治疗提供了新的研究方向。