[发明专利]口腔鳞癌组织脱细胞基质及其制备方法和应用

说明书

本发明属于医用材料技术领域，公开了一种口腔鳞癌组织脱细胞基质及其制备方法和应用。制备方法主要包括以下步骤：将口腔鳞癌组织清洗后切成块；在摇床上，用1％的Triton‑X100处理12h得到初步脱细胞组织；在摇床上，用1％的SDS处理12h；在摇床上，用100U/ml的DNAseⅠ震荡24h；在摇床上，用PBS洗12h得到脱细胞基质；将脱细胞基质置于0.1U/L的青链霉素溶液中封闭保存。该制备方法所需设备要求不高，脱细胞试剂常见便宜，所以构建成本低，实用性强，适合推广。

技术领域

本发明属于医用材料技术领域，具体涉及一种口腔鳞癌组织脱细胞基质及其制备方法和应用。

背景技术

在世界范围内，口腔癌的发病率居全身恶性肿瘤的第六位，其中至少80％是鳞状细胞癌，近几十年来，尽管治疗手段进步，口腔鳞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma，OSCC)患者5年生存率仍未得到明显提高，OSCC发生发展机制仍未被阐明，因此迫切需要深入研究肿瘤生物学行为。目前常见的肿瘤研究方法包括：二维(2D)培养、肿瘤异种移植动物模型、人工合成生物支架。其中2D培养缺乏适当的细胞-细胞和细胞-细胞外基质(Extracellular matrix，ECM)相互作用的三维(3D)结构；动物模型可以模拟人类肿瘤微环境，但动物引入了许多不可控制的变量，包括内源性生长因子的产生和免疫系统的缺乏；人工支架材料虽能建立起细胞生长的3D结构，然而缺乏细胞需要的各种生物成分。

细胞外基质(ECM)是由三维网构成，除了蛋白聚糖和葡糖胺聚糖，胶原蛋白，弹力蛋白和基础纤维之外，还有毛细血管，淋巴管和神经末梢，防御细胞和基底膜。ECM功能非常重要，不仅负责输送营养物质，排除代谢终产物，同时也承担免疫防御功能等作用。运用脱细胞方法制得的支架材料既去除了组织内细胞成分，又在最大程度上完整保留了细胞外基质(ECM)成分及三维立体结构，基于上述特点，可以通过口腔鳞癌组织脱细胞支架(decellularized ECM，dECM)来模拟肿瘤生长三维微环境，从而为肿瘤生物学研究提供新的思路。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题。为此，本发明第一目的在于提供一种口腔鳞癌组织脱细胞基质的制备方法。

为实现第一目的本发明所采用的技术方案为：

一种口腔鳞癌组织脱细胞基质的制备方法，包括以下步骤：

(1)将新鲜或者冻融后的口腔鳞癌组织清洗后切成块；

(2)在摇床上，用1％的Triton-X100处理12h得到初步脱细胞组织；

(3)在摇床上，用1％的SDS处理12h；

(4)在摇床上，用100U/ml的DNAseⅠ震荡24h；

(5)在摇床上，用PBS洗12h得到脱细胞基质；

(6)将脱细胞基质置于0.1U/L的青链霉素溶液中封闭保存。

优选地，所述步骤(1)中，口腔鳞癌组织用PBS冲洗3遍，在4℃将口腔鳞癌组织切成块。

优选地，所述步骤(2)至步骤(5)均在室温条件下进行。

优选地，所述步骤(2)、步骤(3)和步骤(4)结束后均用PBS冲洗脱细胞组织。

优选地，所述步骤(6)中的保存温度为3-5℃或-90℃～-70℃。

优选地，所述步骤(2)至步骤(5)中摇床的转速均为225rpm。

本发明的第二目的在于提供一种采用上述方法制备得到的口腔鳞癌组织脱细胞基质。

本发明的第三目的在于提供一种上述口腔鳞癌组织脱细胞基质作为培养支架的应用。