[发明专利]益生菌嵌合传感器及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种益生菌嵌合传感器的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.益生菌载体菌种挑选：选择合适的益生菌株；

S2.准备用于构建传感器的质粒骨架pRR-thsR和pHK-thsS；

S3.利用步骤S2中的质粒骨架，进行双组分系统组氨酸激酶受体的改造：利用可特异性结合目标蛋白的纳米抗体Nb_CP17的编码序列与计算机模拟分析得到的组氨酸激酶受体结合结构域及两侧位置进行交换融合，构建嵌合型组氨酸激酶受体文库；

S4.利用步骤S3获得的嵌合型组氨酸激酶受体文库，构建可检测钙卫蛋白目标分子的组氨酸激酶嵌合受体的益生菌株：与应答调节因子组成杂合双组分系统，从而创建依赖指定目标蛋白激发的嵌合双组分系统，形成益生菌嵌合传感器；

其中，所述嵌合型组氨酸激酶受体为pHK-P_tac-thsS-Nb_CP，所述应答调节因子为pRR-P_LtetO-1-thsR-sfGFP；

所述Nb_CP17的编码序列为SEQ ID NO：4。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤S1中的益生菌株选自大肠杆菌Nissle1917、乳杆菌或双歧杆菌。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤S3中嵌合型组氨酸激酶受体文库的构建方法如下：

通过三维结构模拟比对，分析获得配体结合结构域对应的编码序列范围，随后采用无缝克隆的方式构建嵌合型组氨酸激酶受体文库。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

1)将pRR-PLtetO-1-thsR-sfGFP电转化导入益生菌株感受态细胞，通过特异性引物扩增筛选得到阳性的转化子；

2)利用步骤1)获得阳性转化子，制作感受态细胞，进一步将嵌合型组氨酸激酶受体文库分别导入已经携带pRR-PLtetO-1-thsR-sfGFP质粒的益生菌株；

3)通过添加IPTG、脱水四环素以及钙卫蛋白至步骤2)中的工程化菌株，获得具有荧光响应信号的菌株，即为可响应钙卫蛋白的组氨酸激酶嵌合受体的益生菌株。

5.一种益生菌嵌合传感器，其特征在于：由权利要求1～4任一权利要求所述的方法构建获得，为包括嵌合型组氨酸激酶受体和应答调节因子双组分系统的益生菌株。

6.权利要求5所述的益生菌嵌合传感器在制备钙卫蛋白标志物检测试剂中的应用。