[发明专利]一种同时测定谷物中DON毒素、NIV毒素及ZEN毒素的方法

说明书

本发明公开了一种同时测定谷物中DON毒素、NIV毒素及ZEN毒素的方法。它包括如下步骤：(1)采用高效液相色谱法分别检测DON毒素、NIV毒素和ZEN毒素的标准品溶液，分别以各标准峰面积为纵坐标，以标准品溶液的浓度为横坐标，进行拟合建立标准曲线；(2)对待测谷物样品进行萃取和多功能净化柱进行分离，收集样品滤液；(3)待测谷物样品中DON毒素、NIV毒素和ZEN毒素含量的测定：按照与步骤(1)相同的色谱检测条件，采用高效液相色谱法测定步骤2)所得样品滤液中组分的峰面积，根据步骤(1)所得标准曲线采用外标法计算，即可得到待测谷物样品中DON毒素、NIV毒素和ZEN毒素的含量。本发明实验过程简、检测效率高、测量结果准确。

技术领域

本发明涉及一种同时测定谷物中DON毒素、NIV毒素及ZEN毒素的方法，属于分析检测领域。

背景技术

小麦赤霉病是小麦抽穗扬花期多雨高湿引起的一种真菌性病害，又被称为烂穗病、麦秸枯、红麦头等。是一种常见的病害，对小麦的稳产、高产以及品质都有很大的影响。赤霉菌的代谢毒素主要包含脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其衍生物、雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、伏马菌素等，这些毒素都在一定程度上影响着人类及家畜的健康。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON毒素)又称呕吐毒素，是小麦中污染率最高的一种倍半萜烯类化合物，它主要由禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌产生。毒素的主要作用机理是其能与真核细胞的核糖体亚基结合，从而阻碍生物体蛋白质的合成，具有明显的细胞毒性。人或家畜接触定量的该毒素后会产生腹泻、头晕、呕吐、腹痛、恶心等一系列症状，具有一定的致癌性，是我国谷类污染物常见的真菌毒素之一。雪腐镰刀菌烯醇(简称NIV毒素)毒性是DON毒素的十倍，人类临床症状主要表现为神经状况异常、吞咽困难、呕吐等，在猫、狗表现有催吐作用。同时对家畜的皮肤组织、造血组织、心血系统以及神经系统也会有一定影响。玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN毒素)又称F-2毒素，摄入ZEN毒素，会对人畜造成急慢性毒性、生殖发育毒性、免疫毒性、细胞毒性等多种毒害作用。可与子宫内雌激素受体不可逆结合，从而影响动物的生殖生理状况，导致动物不孕或流产。ZEN毒素的免疫毒性，会使DNA收敛，染色体失常，从而影响细胞的免疫机能。我国对谷物产品中DON毒素的限量是1000μg/kg，对ZEN毒素的限量是60μg/kg，对NIV毒素还没有一个准确的限量标准。

常见的一些检测真菌毒素的方法主要有薄层色谱测定法(TLC)、气相色谱法(GC)、液相色谱-质谱法(LC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)、酶联免疫(ELISEA)等等。吴振兴等采用免疫亲和层析净化高效液相色谱法同时检测两种毒素，DON毒素和NIV毒素检测低限皆为100μg/kg；梁颖曾用气相色谱-质谱同时检测饲料中的DON毒素和NIV毒素，硅烷化衍生后测出两种毒素的检出限分别为6ng/g和8ng/g；其中NIV毒素经常和DON毒素联合测定，而同时检测这三种毒素的方法较少。因此，为了提高对小麦等谷物测量的效率与安全，开发出一些可以同时检测DON毒素、NIV毒素和ZEN毒素的方法是十分有意义的。

发明内容

本发明的目的是提供一种同时测定谷物中DON毒素、NIV毒素及ZEN毒素的方法，本发明实验过程简、检测效率高、测量结果准确。

本发明提供的一种同时测定谷物中DON毒素、NIV毒素及ZEN毒素的方法，包括如下步骤：

(1)标准曲线的绘制：

采用高效液相色谱法分别检测DON毒素、NIV毒素和ZEN毒素的标准品溶液，分别以各标准峰面积为纵坐标，以所述标准品溶液的浓度为横坐标，单位为μg/ml，进行拟合，得到DON毒素、NIV毒素和ZEN毒素的标准曲线；

(2)待测谷物样品前处理：

1)将待测谷物样品置于溶剂中萃取，过滤收集滤液；

2)将步骤1)所得滤液采用多功能净化柱进行分离，收集分离液除去溶剂，再加入流动相溶解，过滤收集样品滤液；