[发明专利]一种荞麦碱提取物用于乳腺炎疾病治疗的实验方法

权利要求书

1.一种荞麦碱提取物用于乳腺炎疾病治疗的实验方法，其特征在于：包括以下步骤，其中荞麦碱提取物含有53.6％芦丁和37.2％槲皮素：

S1、本实验选择8周龄的ICR小鼠进行合笼，每笼1公3母，选取分娩后3至7天的ICR小鼠作为实验对象；

S2、将小鼠分为三组，空白对照组(NT)，乳腺炎模型组(LPS)，给药治疗组(LPS+TBF)，每组3只小鼠；

S3、给小鼠进行腹腔注射荞麦碱提取物给药1次，给药浓度为10mg/kg，每只小鼠注射0.4mL，给药时间为注射LPS前1h；

S4、在注射LPS后24h进行乳腺的取样，一部分乳腺组织用于石蜡切片的制作，观察乳腺组织的病理损伤情况；

S5、取一部分乳腺组织用于MPO活性测定，通过MPO活性的高低可以反应白细胞如中性粒细胞在组织内的浸润情况，用来评估乳腺组织内炎症反应的严重程度。

2.根据权利要求1所述的一种荞麦碱提取物用于乳腺炎疾病治疗的实验方法，其特征在于:按45mg/kg的比例配制戊巴比妥钠溶液进行小鼠的麻醉，并将其仰面保定，将第四对乳区周围进行消毒，剪掉约1mm乳头，两侧乳头均注射50μL浓度为0.2mg/ml的LPS，LPS注射后24h采取样品并放在-80℃冰箱保存。

3.根据权利要求1所述的一种荞麦碱提取物用于乳腺炎疾病治疗的实验方法，其特征在于：石蜡切片的制作过程如下：取出新鲜的乳腺组织，将其用PBS涮洗，紧接着放进提前用PBS配置好的浓度为4％的甲醛溶液中固定24h，经过不同浓度的酒精梯度脱水、放入二甲苯中透明、浸蜡、包埋、切片、HE染色等步骤获取HE染色结果；最后评估乳腺组织的病理损伤情况。

4.根据权利要求1所述的一种荞麦碱提取物用于乳腺炎疾病治疗的实验方法，其特征在于：MPO的实验步骤如下：将新鲜乳腺组织样品放入2mL研磨管中，并按照一定比例加入HEPES+STI进行研磨，离心后弃掉上清，再按照同样比例加0.5％的CTAC，离心后取上清液，按10倍比例进行稀释，取96孔板，在其中加75μL样品，75μL底物进行显色反应，2min内加75μL稀释好的浓硫酸终止显色反应，10min内放入酶标测定仪测定OD值，获取数据后分析乳腺组织内炎症反应的严重程度。