[发明专利]一种木腐菌的冷冻保藏方法

权利要求书

1.一种木腐菌的冷冻保藏方法，其特征在于，其包括如下步骤：以木屑颗粒为载体，待保藏的木腐菌的菌丝蔓延生长至所述木屑颗粒的内部后，将生长有待保藏木腐菌的木屑颗粒进行冷冻保藏。

2.根据权利要求1所述的木腐菌的冷冻保藏方法，其特征在于，所述冷冻保藏方法包括：先将木屑颗粒置于培养基上，然后将待保藏的木腐菌接种至所述培养基上，培养至菌丝蔓延生长至所述木屑颗粒的内部后，将生长有待保藏木腐菌的木屑颗粒进行冷冻保藏。

3.根据权利要求2所述的木腐菌的冷冻保藏方法，其特征在于，所述待保藏的木腐菌在所述培养基上的培养温度为15-30℃；

优选地，所述培养时间为8-20d。

4.根据权利要求1所述的木腐菌的冷冻保藏方法，其特征在于，所述冷冻保藏方法包括：先将待保藏的木腐菌接种至培养基上进行一次培养，然后将木屑颗粒置于一次培养后培养基中，进行二次培养，待木腐菌的菌丝蔓延生长至所述木屑颗粒的内部后，将生长有待保藏木腐菌的木屑颗粒进行冷冻保藏。

5.根据权利要求4所述的木腐菌的冷冻保藏方法，其特征在于，所述一次培养的时间为3-20d，所述二次培养的时间为7-20d；

优选地，所述一次培养的温度为15-30℃，所述二次培养的温度为15-30℃。

6.根据权利要求2-5任一项所述的木腐菌的冷冻保藏方法，其特征在于，所述培养基为平板培养基或者斜面培养基；

优选地，所述培养基为PDA培养基、PSA培养基、马铃薯综合培养基、RM培养基、马铃薯木屑煎汁琼脂培养基、木屑麦麸琼脂培养基、米糠煎汁琼脂培养基、木腐菌标准培养基、麦芽浸膏琼脂培养基或伞菌培养基。

7.根据权利要求1-6任一项所述的木腐菌的冷冻保藏方法，其特征在于，所述木屑颗粒选自阔叶树的木屑颗粒；

优选地，所述阔叶树为栎木、青冈木、栗木、桦木、桤木、栲树、苹果木、香樟、银桦、灯台树、白云兰、辛夷、红叶桃、柏杨、垂柳、榆树、合欢、国槐、龙爪槐、山杨、石榴、紫薇、红叶李、木芙蓉、法国冬青、天竺桂、枫香和杜英中的至少一种；

优选地，所述木屑颗粒为无菌处理后的木屑颗粒；所述无菌处理步骤包括将待处理的木屑颗粒用水预湿后进行灭菌处理；

优选地，所述无菌处理步骤包括：将待处理的木屑颗粒置于水中充分浸泡，煮沸20-30min，沥干，然后在119-122℃下进行蒸汽灭菌；

优选地，所述木屑颗粒为直径3-8mm，厚度2-5mm的片状或者块状木屑颗粒。

8.根据权利要求1所述的木腐菌的冷冻保藏方法，其特征在于，所述将生长有待保藏木腐菌的木屑颗粒进行冷冻保藏包括：将生长有待保藏木腐菌的木屑颗粒置于冻存管中，并向所述冻存管中添加冷冻保护剂，然后将冻存管置于程序降温仪中降温，降温后将所述冻存管置于低温下保藏；

优选地，设置所述程序降温仪的降温程序为：在常温下先以4-5℃/min降至4℃，然后以0.8-2℃/min降至-90℃；

优选地，冷冻保护剂为：5-10％甘油；

优选地，降温后将所述冻存管置于液氮罐中保藏。

9.根据权利要求8所述的木腐菌的冷冻保藏方法，其特征在于，所述冷冻保藏方法还包括菌种的复苏，所述菌种的复苏包括如下步骤：将所述冻存管从液氮罐中取出，进行恒温水浴，待生长有木腐菌的木屑颗粒完全融化后转接至培养基上进行菌种的复苏培养；

优选地，恒温水浴是在30-38℃下水浴；所述恒温水浴时间为1-8min。

10.根据权利要求1所述的木腐菌的冷冻保藏方法，其特征在于，所述木腐菌选自如下菌中的任意一种：香菇、平菇、金针菇、杏鲍菇、木耳、银耳、灰树花、猴头菇、真姬菇、茶树菇和秀珍菇。