[发明专利]一种低温高效玉米秸秆降解菌剂的制备方法及应用

权利要求书

1.一种玉米秸秆降解菌剂的制备方法，其特征在于，经以下步骤制备获得：

步骤1：菌种活化：将保存于-80℃温度条件的两个单株细菌菌株取出，分别接种于LB琼脂培养基，在28℃培养箱中倒置培养30h，所述两个单株细菌分别为假单胞菌（Pseudomonassp.）和不动杆菌（Acinetobacter sp.）两种细菌；

所述假单胞菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为：2020年08月11日，保藏编号为CGMCCNo.20521；

所述不动杆菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为：2020年08月11日，保藏编号为CGMCCNo.20522；

步骤2：种子液制备：在无菌条件下，将活化后的各菌种分别接入到2个装有液体种子培养基的锥形瓶中，置于摇床培养；摇床参数设置为：温度28 ℃，转速150 r/min；至各菌液外观浑浊透彻，菌种生长曲线处于对数生长期且活菌数最多时即作为种子液使用；

步骤3：发酵；将装有LB液体培养基的发酵装液罐整体置于110-130℃的灭菌锅灭菌18-21min后冷却，在火焰保护下打开接种口，将培养好的种子液按照两个单菌总接种量10%的比例投放到发酵罐内发酵，其中两个单菌的接种量的比例为1：1；发酵条件为：发酵罐容积为5L，装液量为4L，温度为28℃，菌液初始pH值为6.85±0.05，通气量为1L/min，搅拌速度为300r/min，发酵培养28h；

步骤4：制剂；将发酵完毕的菌液，配以灭菌后的载体和保护剂，其中载体材料为玉米外皮秸秆粉，保护剂材料为淀粉；菌液:载体和保护剂的比例为10:3，单位为ml/g；在冷冻干燥机中冻干，制备成粉状菌剂；

载体与保护剂比例为1:1，单位为g/g。

2.根据权利要求1所述的菌剂的制备方法，其特征在于，菌剂冷冻干燥的操作方式为：

步骤1：预冻；在冷冻干燥机中，预冻温度为-40℃，变温时间为5min，持续时间为180min；

步骤2：升华干燥；升华干燥第一阶段：温度为-10℃，变温时间为5min，持续时间为30min，真空度为0.18mbar；升华干燥第二阶段：温度为0℃，变温时间为5min，持续时间为30min，真空度为0.20mbar；升华干燥第三阶段：温度为10℃，变温时间为5min，持续时间为30min，真空度为0.21mbar；升华干燥第四阶段：温度为40℃，变温时间为5min，持续时间为30min，真空度为0.22mbar；

步骤3：解析干燥；温度为40℃，持续时间为180min，真空度为0mbar。

3.根据权利要求1所述的菌剂的制备方法，其特征在于，冷冻干燥机装料量为3100±20g。

4.一种由权利要求1所述的制备方法制备得到的玉米秸秆降解菌剂的应用，其特征在于：将所述菌剂施撒在玉米秸秆中。

5.根据权利要求4所述玉米秸秆降解菌剂的应用，其特征在于，玉米秸秆与菌剂的比例为800:1。

6.根据权利要求4所述玉米秸秆降解菌剂的应用，其特征在于，施用时每克秸秆需配施0.02g磷酸铵和0.01g尿素。

7.根据权利要求4所述玉米秸秆降解菌剂的应用，其特征在于，秸秆埋地深度为25±5cm。