[发明专利]一种尖头鱥精子高效超低温冷冻保存方法在审
| 申请号： | 202110220020.X | 申请日： | 2021-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN112970742A | 公开（公告）日： | 2021-06-18 |
| 发明（设计）人： | 胡鹏;熊小琴;王庆龙;徐其林;周瑶;易霞 | 申请（专利权）人： | 内江师范学院 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京化育知识产权代理有限公司 11833 | 代理人： | 尹均利 |
| 地址： | 641000 *** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 尖头 精子 高效 超低温 冷冻 保存 方法 | ||
1.一种尖头鱥精子高效超低温冷冻保存方法，其特征在于：
将尖头鱥的精液与抗冻液按体积比1:40的比例混合，混合后经过程序降温仪分步降温处理，最终投入到液氮(-196℃)，分装保存；抗冻液由稀释液、抗冻剂两部分组成，其中稀释液为NaCl 9.00g/L，KCl 0.42g/L，CaCl20.24g/L，MgSO4·7H2O 0.15g/L，NaHCO30.20g/L，NaH2PO30.05g/L，牛磺酸4.5g/L溶液；抗冻剂为35％(V/V)DMSO(二甲基亚砜)。
2.按权利要求1所述的尖头鱥精子高效超低温冷冻保存方法，其特征在于：所述稀释液为取NaCl 9.00g，KCl 0.42g，CaCl20.24g，MgSO4·7H2O 0.15g，NaHCO30.20g，NaH2PO30.05g，牛磺酸4.5g加入蒸馏水充分溶解，后放入定量瓶中中定量至1L即得；所述抗冻液为取配置好的稀释液650mL，加入350mLDMSO(二甲基亚砜)，充分混匀即得。
3.按权利要求1所述的尖头鱥精子高效超低温冷冻保存方法，其特征在于：选用0.5mL的麦管，每管加入500μL提前5min按1:40体积比混匀的尖头鱥精液与抗冻液混合液，麦管开口处迅速蘸取四氢呋喃溶解的PVC塑料1-2秒钟，放入4℃冰箱预冷1min，使抗冻保护剂充分渗入细胞中。
4.按权利要求1所述的尖头鱥精子高效超低温冷冻保存的方法，其特征在于：将分装后的混合液放入程序降温仪，然后按照-25℃/min的降温程序降温至-100℃，再迅速投入液氮中保存。
5.按权利要求1所述的尖头鱥精子高效超低温冷冻保存方法，其特征在于：解冻时将麦管用镊子从液氮中捞出，然后迅速将麦管放入15℃恒温水浴锅中水浴解冻10-15秒，轻轻摇动使其受温均匀，解冻后迅速取出。
6.按权利要求1所述的尖头鱥精子高效超低温冷冻保存方法，其特征在于：用剪刀剪断麦管两端，让精液混合液流入到载玻片中，加入Actifish精子活力激活液激活精子，镜检其活力。
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