[发明专利]一种基于荧光RMA法多重检测禽流感病毒H5、H7、H9亚型的引物探针组及试剂盒

说明书

本申请为病毒检测技术领域，具体为一种基于荧光RMA法多重检测禽流感病毒H5、H7、H9亚型的引物探针组及试剂盒，所述引物探针组包括检测禽流感病毒H5亚型的引物和探针、检测禽流感病毒H7亚型的引物和探针、检测禽流感病毒H9亚型的引物和探针；所述试剂盒包括含有扩增反应试剂的检测管、缓冲液、醋酸镁、标准阳性质粒、无菌双蒸水。

技术领域

本申请为病毒检测技术领域，具体为一种基于荧光RMA法多重检测禽流感病毒H5、H7、H9亚型的引物探针组及试剂盒。

背景技术

禽流感病毒(Avian Influenza Virus，AIV)属正黏病毒科甲型流感病毒属，是一种单股负链RNA病毒。依据其外膜血凝素(H)和神经氨酸酶(N)蛋白抗原性的不同，可分为16个H亚型(H1～H16)和9个N亚型(N1～N9)。感染人的禽流感病毒亚型主要为H5N1、H9N2、H7N7等，其中感染H5N1的患者病情重，病死率高。禽流感疾病在病发初期由于症状不明显，很容易被误诊为其他疾病。因此，建立一种快速、多重检测禽流感病毒H5、H7、H9亚型的试剂盒及其检测方法很有必要。

目前禽流感的检测主要为病毒分离与鉴定、血清学检测及分子生物学方法等。其中，病毒分离与鉴定和血清学检测方法检测速度慢、操作比较复杂；荧光定量PCR方法对人员素质及设备要求都很高，难于在基层诊断实验室普及应用。而重组酶介导扩增(Recombinase Mediated Amplification,RMA)技术，是近年来发展出的一种敏感、特异、简便、快捷的等温核酸扩增技术，被认为是可替代PCR的核酸检测技术，主要依赖重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶三种酶。RMA反应可以在37～42℃进行，整个过程在30min内即可达到检测水平，可实现禽流感病毒H5、H7、H9亚型的快速检测。

本发明在荧光RMA法的基础上开发了多重检测禽流感病毒H5、H7、H9亚型的试剂盒。

发明内容

为了解决现有技术的问题，本申请提供了一种基于荧光RMA法多重检测禽流感病毒H5、H7、H9亚型的引物探针组及试剂盒，本申请是通过下述方案实现的：

一种基于荧光RMA法多重检测禽流感病毒H5、H7、H9亚型的引物探针组，包括检测禽流感病毒H5亚型的引物和探针、检测禽流感病毒H7亚型的引物和探针、检测禽流感病毒H9亚型的引物和探针，其中，

(1)AIV-H5引物和探针序列为：

AIV-H5-F：

5’-TTCTGAGGGATTGTAGTGTAGCTGGATGGCTCC-3’；

AIV-H5-R：

5’-GCATCATTAGGATGATGAATCCCCCACAGCACC-3’；

AIV-H5-P：

5’-AGTGGAGAAGGACAACCCAGTCAATGGCC(FAM-dT)C(THF)GC(BHQ1-dT)ACCCAGGGGACTTCA(C3-spacer)-3’。

(2)AIV-H7引物和探针序列为：

AIV-H7-F：

5’-AGAGGCGAGAAGGAAGTGATGTCTGTTACCCTG-3’；

AIV-H7-R：

5’-ATCCTGATCTCCTACATGCACTGGTTGCTCCAT-3’；

AIV-H7-P：

5’-ATTCGTGAATGAAGAAGCTCTGAGGCAAA(HEX-dT)(THF)C(BHQ1-dT)CAGGGAGTCAGGAG(C3-spacer)-3’。