[发明专利]定量检测末梢血样本中脂溶维生素含量的方法

说明书

本发明涉及一种定量检测血浆样本中抗病毒药物含量的方法，所述方法包括如下步骤：(1)采集微量末梢血；(2)将末梢血全血样本与含有内标的蛋白沉淀液混合，涡旋后离心，将上清液稀释得到待检测液；(3)采用高效液相色谱串联质谱系统对待检测液进行检测和分析。本发明提供了一种同时检测末梢血样本中维生素A、维生素D2、维生素D3及维生素E的方法，前处理简单，检测成本低，检测效率高。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，主要涉及一种定量检测末梢血样本中脂溶性维生素含量的方法。

背景技术

脂溶性维生素是指易溶于有机溶剂而不溶于水的一类维生素，主要包括维生素A、维生素D和维生素E等。该类维生素能溶解于脂肪，不易被排泄，可储存于体内，对于人体的代谢和机能起着非常重要、不可或缺的作用。维生素A、 D、E分别以酶和辅基激活剂的形式参与蛋白质、酶、激素和维生素的合成、分解与转化，影响人体生长发育、新陈代谢、免疫调节等生理活动。因此，将机体脂溶性维生素水平保持在适宜范围非常重要，A、D、E缺乏可引起多种疾病，而过量摄入又会导致中毒。

目前，临床上检测多种脂溶性维生素(包括维生素A、维生素D3、维生素 D2以及维生素E等)的方法主要包括免疫法、电化学法、色谱法以及液相色谱串联质谱法等，主流的脂溶性维生素检测样本类型为血清，检测所需血样量相对较多，但是由于婴幼儿特别是新生儿群体存在采血不便的情况，难以分离足量血清进行检测。但脂溶性维生素缺乏为小儿常见病，因此微量末梢血全血的脂溶性维生素检测项目具有非常重要的意义，但针对末梢血全血脂溶性维生素检测的文献及专利较少。

CN110488008A及CN 110488004A中分别公布了检测末梢血25-羟基维生素 D3及末梢血25-羟基维生素D的试剂盒及其制备方法和应用，这两种试剂盒分别包括25羟基维生素D3免疫层析检测卡和释放剂以及25羟基维生素D免疫层析检测卡和释放剂，所述免疫层析检测卡包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，所述检测线上包被有25-羟基维生素D3或25-羟基维生素D完全抗原，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体。这两种方法的缺点在于仅能检测末梢血中的25-羟基维生素D3或25-羟基维生素D，未能对其它种类的脂溶性维生素进行检测。

CN108802221A中公布了一种末梢血中维生素A和维生素E的微量检测方法，其检测步骤包括：1.末梢血样品加入含有内标及BHT的甲醇溶液，完成蛋白沉淀；2.加入特丁基甲醚进行液液萃取，室温下氮气吹干萃取上清液，并加入 80％甲醇复溶，涡旋震荡后离心得到待测样本；3.以超高效液相色谱串联质谱检测：通过超高效液相色谱串联质谱检测获得所述待测样本中待测物的峰面积和对应内标峰面积，完成微量末梢血样本中维生素A和维生素E的检测。CN 110208435A中公布了同时检测人末梢血中25-羟基维生素D3和25-羟基维生素 D2含量的方法，其步骤与CN108802221A中公布的样本前处理及检测步骤比较类似，但是所使用试剂的种类不同：1.末梢血样品加入含有内标的乙醇溶液，进行蛋白沉淀；2.加入正己烷进行液液萃取，室温下氮气吹干萃取上清液，并加入含甲酸的甲醇水复合溶液，涡旋震荡后离心得到待测样本；3.以高效液相色谱串联质谱检测完成微量末梢血样本中维生素D2和维生素D3的检测。这两种检测方法只能同批检测脂溶维生素D2和维生素D3，且前处理步骤非常复杂，耗时耗力并且难以实现高通量自动化操作。