[发明专利]一种绒毛组织原位载玻片培养法及染色体制备方法在审
申请号: | 202110229243.2 | 申请日: | 2021-03-02 |
公开(公告)号: | CN112903395A | 公开(公告)日: | 2021-06-04 |
发明(设计)人: | 沈学萍;阳鑫妙;唐克峰 | 申请(专利权)人: | 湖州市妇幼保健院 |
主分类号: | G01N1/28 | 分类号: | G01N1/28;G01N1/30 |
代理公司: | 浙江千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人: | 沈涛 |
地址: | 313000 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 绒毛 组织 原位 载玻片 培养 染色体 制备 方法 | ||
1.一种绒毛组织细胞原位载玻片培养法,其特征在于:包括以下步骤:
①前处理:无菌条件下取绒毛组织样本,对其进行冲洗,直至无可见血红色,剔除其他组织后加入双抗溶液,然后在二氧化碳培养箱中36-38℃温育0.5-1.5小时;
②消化:将绒毛组织样本剪碎,离心弃上清;再加入胎牛血清培养基洗涤,离心弃上清;然后加入组织消化液,在二氧化碳培养箱中36-38℃温育0.5-1.5小时;
③接种:将消化后样本离心,弃上清;加入胎牛血清培养基洗涤,离心弃上清;再加入胎牛血清培养基,混匀得到悬液,吸取悬液加至原位培养盒内的载玻片上,将原位培养盒平置于二氧化碳培养箱于36-38℃进行预培养;
④培养:预培养20-25h后在原位培养盒中加入胎牛血清培养基,培养20-25h后进行换液;培养20-25h后再次换液,再培养20-25h,得到具有绒毛细胞的载玻片。
2.根据权利要求1所述的绒毛组织细胞原位载玻片培养法,其特征在于:步骤①中,所述绒毛组织样本为至少10mg的绒毛分枝样本。
3.根据权利要求1所述的绒毛组织细胞原位载玻片培养法,其特征在于:步骤①中,绒毛组织样本用无菌生理盐水冲洗。
4.根据权利要求1所述的绒毛组织细胞原位载玻片培养法,其特征在于:步骤②中,所述组织消化液为胰蛋白酶溶液或者胶原酶Ⅱ溶液。
5.根据权利要求1所述的绒毛组织细胞原位载玻片培养法,其特征在于:所述载玻片包括夹取区和培养区,所述培养区表面经过硅化处理、多聚赖氨酸处理或者胶原蛋白处理。
6.根据权利要求5所述的绒毛组织细胞原位载玻片培养法,其特征在于:所述培养区表面为光滑面。
7.一种绒毛组织细胞的染色体制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)按照权利要求1-6任一项所述的绒毛组织细胞原位载玻片培养法制得具有绒毛细胞的载玻片;
(2)在装有步骤(1)载玻片的原位培养盒内加入秋水仙碱溶液,与盒内培养基混匀后在36-38℃下静置25-35分钟;
(3)去除原位培养盒内液体,加入低渗液室温下静置25-30分钟;
(4)去除原位培养盒内液体,加入预固定液静置5-10分钟;
(5)去除原位培养盒内液体,加入固定液固定,再去除原位培养盒内液体,重复固定三次;
(6)取出载玻片,将其放入染色体分散仪中行分散;
(7)将载玻片在85-95℃下烘烤2.5-3.5h,然后在36-38℃下过夜老化;
(8)采用G显带染色法对载玻片上细胞进行染色体染色。
8.根据权利要求7所述的绒毛组织细胞的染色体制备方法,其特征在于:步骤(5)中,重复固定三次时,第一次固定时,加入固定液后静置时间不超过1分钟,第二次与第三次固定时,加入固定液后静置10-20分钟。
9.根据权利要求7所述的绒毛组织细胞的染色体制备方法,其特征在于:步骤(6)中,染色体分散仪设置的分散条件为温度23-26℃,湿度48-53%。
10.根据权利要求7所述的绒毛组织细胞的染色体制备方法,其特征在于:所述低渗液为枸橼酸三钠溶液,所述预固定液为冰醋酸,所述固定液为甲醇-冰醋酸溶液。
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