[发明专利]一种Fmoc-Cys(trt)-OH有关物质的检测方法

说明书

本发明涉及一种Fmoc‑Cys(trt)‑OH有关物质检测方法，其参数条件如下：检测波长为220nm，所用流动相为乙腈和水，同时添加TFA的离子对溶液，梯度变化中乙腈体积含量为50~100~50％，水的体积含量为50~0~50％；检测时所用的色谱柱的固定相为十八烷基硅烷。本发明提供的Fmoc‑Cys(trt)‑OH有关物质检测方法，检测速度较快，结果准确，方法步骤简单，便于操作，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及多肽领域，具体涉及一种Fmoc-Cys(trt)-OH有关物质的检测方法。

背景技术

FMOC-半胱氨酸(TRT)，Fmoc-Cys(trt)-OH，又名N-[(9H-芴-基甲氧基)羰基]-S-(三苯甲基)-L-半胱氨酸；芴甲氧羰基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸；FMOC-S-TRITYL-L-半胱氨酸；FMOC-L-半胱氨酸(TRT)；(ChemicalbookR)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(三苯甲基硫代)丙酸；Fmoc-S-三苯甲基-L-半胱氨酸；FMOC-S-苯甲基-L-半胱氨酸。

Fmoc-Cys(trt)-OH的结构式如下所示：

L-半胱氨酸是一种生物体内常见的氨基酸，是合成多肽的重要原料。为含硫α-氨基酸之一，遇硝普盐(nitroprusside)呈紫色(因SH而显色)，存在于许多蛋白质、谷胱甘肽中，与Ag+，Hg+，Cu+等金属离子可形成不溶性的硫醇盐(mercaptide)。即R-S-M′，R-S-M″-S-R(M′，M″各为1价、2价金属)，分子式C₃H₇NO₂S，分子量121.16，无色晶体，溶于水、乙醇、乙酸和氨水，不溶于乙醚、丙酮、乙酸乙酯、苯、二硫化碳和四氯化碳。在中性和弱碱性溶液中能被空气氧化成胱氨酸。

半胱氨酸衍生物包括多种半胱氨酸类药物。半胱氨酸盐酸盐，临床上用于肝炎及重金属中毒等。半胱氨酸是组成谷胱甘肽的天然成分之一，分子中含有活泼的巯基(-SH)，对巯基蛋白酶、受毒害的肝实质细胞，具有保护作用，并能刺激造血机能，增加白细胞和促进皮肤损伤的修复。半胱氨酸的衍生物乙酰半胱氨酸、半胱氨酸甲酯、半胱氨酸乙酸及羧甲半胱氨酸，为呼吸道黏液溶解剂，并具有促进受损支气管黏膜的修复作用。

在Fmoc-Cys(trt)-OH的合成工艺中，难免会引入一系列的杂质如异构体杂质等，这些杂质统称为有关物质其存在会严重影响Fmoc-Cys(trt)-OH成品的质量。因此，对Fmoc-Cys(trt)-OH的有关物质进行严格的质量控制具有重要的现实意义。

本发明在充分研究Fmoc-Cys(trt)-OH有关物质的基础上，开发其检测方法，从而从源头上控制了多肽药物杂质的限度。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种操作方便快捷、结果准确的Fmoc-Cys(trt)-OH有关物质检测方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

一种Fmoc-Cys(trt)-OH有关物质检测方法，参数条件如下：

检测波长为220nm，所用流动相为乙腈和水，同时添加TFA的离子对溶液，梯度变化中乙腈体积含量为50～100～50％，水的体积含量为50～0～50％；检测时所用的色谱柱的固定相为十八烷基硅烷。

优选的，所述有关物质检测方法中色谱柱可以选自Kromasil 100A C18 5u 250*4.6mm，SinoChrom ODS-BP 5μ4.6mmx250mm或Symmetry Shield RP18 5um 4.6*250mm。

优选的，所述有关物质检测方法中柱温为20～40℃，流动相流速为0.8～1.2ml/min。