[发明专利]一种同时检测血液样品中多种胆汁酸的方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种同时检测血液样品中多种胆汁酸的方法及试剂盒，属于胆汁酸检测技术领域。本发明公开的一种同时检测血液样品中多种胆汁酸的方法，先对样本进行前处理，再进入色谱分离及质谱检测，针对每种胆汁酸分别选择一对定性离子和一对定量离子，以各种胆汁酸的相对保留时间和定性离子对作为定性依据，以标准品制作标准曲线定量。同时，本发明方法应用三个水平的质控品考察方法的准确性、有效性，避免检测结果失真。本发明首次实现了应用LC‑MS技术对一份血清样本中的十五种胆汁酸同时检测的目的，减小了干扰物影响，该方法操作简便快速，有效监测人体内胆汁酸水平，对胆汁酸的合理、安全补充具有指导意义，易于临床推广及普及。

技术领域

本发明涉及胆汁酸检测技术领域，更具体的说是涉及一种同时检测血液样品中多种胆汁酸的方法及试剂盒。

背景技术

胆汁酸由胆固醇代谢产生，根据合成途径，可以分为由胆固醇为原料直接合成的初级胆汁酸和代谢产生的次级胆汁酸。胆汁酸是胆汁的重要组成成分，是人体脂肪代谢的必须物质。胆汁酸不仅能够调节葡萄糖和脂肪代谢，还能与肠道菌群相互作用，具有重要的临床意义。现有检测方法只能简单地定量测量总胆汁酸水平，不能定量检测每一种亚型的胆汁酸在体内的水平。

现有技术中，常用的胆汁酸检测方法主要包括气相色谱法、液相色谱法、毛细管电泳法、气相色谱-质谱联用法，以及液相色谱-串联质谱法等。但是目前对于检测人体血清中胆汁酸亚型的研究相对较少，方法通量较低，也缺乏健康人参考范围。

因此，提供一种同时检测血液样品中多种胆汁酸的方法及试剂盒是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种同时检测血液样品中多种胆汁酸的方法及试剂盒。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种同时检测血液样品中多种胆汁酸的方法，采用LC-MS检测血液样品中多种胆汁酸；色谱条件：色谱柱：Waters ACQUITYUPLC HSS T3，1.8μm，2.1×100mm，柱温：30℃；流动相A：5mM乙酸铵溶液，流动相B：乙腈；梯度洗脱条件：0-1.2min 30-35％B,1.2-2min 35％B,2-3min 35-41％B,3-4min 41-45％B,4-4.5min 45％B,4.5-5.3min 45％B,5.3-5.5min45-80％B,5.5-7.5min 80％B,7.5-8.7min 80-35％B,8.7-9.2min 35％B,9.2-10.5min35％B，流速0.4mL/min，进样量1μL；质谱条件：采用ESI源，MRM正负离子扫描模式，雾化气流量为3L/min，加热气流量为13L/min，接口温度为350℃，DL温度为250℃，加热块温度为400℃，干燥气流量为7L/min。

梯度洗脱条件：

MRM质谱参数如下：

进一步，所述血液样品为血浆或血清。

进一步，所述多种胆汁酸为牛磺熊去氧胆酸、牛磺脱氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、去氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、甘氨胆酸、胆酸、石胆酸、牛磺胆酸和牛磺石胆酸中的至少两种。

优选地，所述多种胆汁酸为牛磺熊去氧胆酸、牛磺脱氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、去氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、甘氨胆酸、胆酸、石胆酸、牛磺胆酸和牛磺石胆酸。

进一步，一种同时检测血液样品中多种胆汁酸的方法，具体步骤如下：