[发明专利]一种液体菌剂及其制备方法

说明书

本发明涉及微生物发酵领域，特别是涉及一种液体菌剂及其制备方法，所述液体菌剂包括促生拮抗菌M18、所述发酵培养基和菌体保护剂；以发酵培养基的总体积为基准，所述发酵培养基中包括：葡萄糖0.8～1.2g/100ml，复合氨基酸0.6～1.4g/100ml，硫酸铵0.1～0.4g/100ml，硝酸镧0.0015～0.0045g/100ml。所述制备方法包括以下步骤：1)配制所述发酵培养基；2)向所述发酵培养基中接种促生拮抗菌M18并培养；3)培养结束后向发酵液中加入菌体保护剂。本发明的液体菌剂可直接用于防治多种植物真菌性病害和促进植物幼苗的生长。优化后摇瓶发酵活菌产量可达350亿CFU/ml以上，本发明的制备方法提高了促生拮抗菌M18的发酵水平和活菌稳定性；同时不产生废水和废渣。

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，特别是涉及一种液体菌剂及其制备方法。

背景技术

促生拮抗菌M18于植物根际土壤中分离得到，该菌类属荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)，已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.0462，在中国专利CN00119857.2中，发明人许煜泉、冯镇泰描述了生物农药促生拮抗菌M18及其制备方法，发明内容主要是：设计并应用了新的高效筛选培养程序，从植物根际土壤中制备出同时具有促进植物生长和广谱性抑制植物真菌性病害的生物农药促生拮抗菌M18；该发明产品能有效地抑制甜瓜蔓枯病菌、水稻纹枯病菌和黄瓜枯萎病菌等多种植物病菌的生长，并对植物幼苗的生长具有明显的促进作用。该专利的描述被参考并结合于本文中。

在上述专利中，发明人还描述了将促生拮抗菌M18制成活菌制剂的方法，活菌数可达10¹⁰CFU/ml，保存6个月的活菌数仍能达到10⁸CFU/ml；具体制备过程是将该目标菌置于经高压灭菌的培养基上，25～30度振荡培养1～5天，得到促生拮抗菌M18，所述的培养基的配方为(重量百分比)：甘油0.5％～2.5％、蛋白胨1％～3％、磷酸氢二钾0.01％～0.05％、硫酸镁0.05％～0.35％、余量为水、pH5.5～7.5。该方法的缺点是M18菌剂活菌数偏低，储存稳定性差。

目前利用促生拮抗菌M18于发酵罐中深层培养再经提取和纯化，可以得到代谢产物吩嗪-1-羧酸(phenazine-1-carboxylic acid，简称PCA)，又称申嗪霉素，是一种吩嗪类农用广谱杀菌剂，把它制成悬浮剂或可湿性粉剂用于防治植物真菌性病害，该工艺的缺点是发酵后提取纯化申嗪霉素的过程中会产生大量的废水和废渣，环保处置难度大。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种液体菌剂及其制备方法，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明首先提供一种发酵培养基，以发酵培养基的总体积为基准，所述发酵培养基中包括以下组分：

本发明还提供一种液体菌剂，所述液体菌剂包括促生拮抗菌M18、所述发酵培养基和菌体保护剂。

本发明还提供一种液体制剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

1)配制所述发酵培养基；

2)向所述发酵培养基中接种促生拮抗菌M18并培养；

3)培养结束后向发酵液中加入菌体保护剂。

如上所述，本发明的液体菌剂及其制备方法，具有以下有益效果：液体菌剂可直接用于防治多种植物真菌性病害和促进植物幼苗的生长。优化后摇瓶发酵活菌产量可达350亿CFU/ml以上，具有很大生产优势。采用本发明的液体制剂的制备工艺，提高了促生拮抗菌M18的发酵水平和活菌稳定性；同时无提取和纯化步骤，不产生废水和废渣，不需后续环保处置措施。

具体实施方式