[发明专利]一种酶催化制备聚槲皮素的方法及聚槲皮素的应用

权利要求书

1.一种聚槲皮素滴眼液，其特征在于各成分及其含量为：在每10ml磷酸盐缓冲溶液中，加入的聚槲皮素冻干粉的含量为20～100ug；该滴眼液有水溶性、角膜穿透、抗真菌、抗炎的作用；所述的聚槲皮素冻干粉的制备方法包括7个工艺步骤：

(1)在pH为4.5、温度为25℃的条件下，将分析纯99％的甲醇和浓度为100mM的磷酸盐缓冲液按照体积比为1：1的比例混合，形成甲醇和磷酸盐缓冲液混合溶液，然后用盐酸调整混合溶液的pH为4.5；在每100mL pH 4.5的甲醇和磷酸盐缓冲液的混合物中加入300～700mg浓度为10mM的槲皮素甲醇混合溶液,其溶剂为甲醇，形成反应液；

(2)将步骤(1)制得的反应液在25℃下连续搅拌48小时后，在通风阴暗的环境中，向反应液中加入总活性为30～60U的漆酶和磷酸盐缓冲液的混合溶液，其中磷酸盐缓冲液的浓度为100mM，反应48小时并连续搅拌，混合溶液的颜色逐渐变暗，反应式为：

(3)将步骤(2)制得的混合溶液放入4℃的冰箱中，并持续搅拌24小时以使聚合物沉淀；

(4)将步骤(3)制得的沉淀聚合物在离心机上以8000rpm离心100分钟；

(5)将丙酮和去离子水溶液按照体积比1：3的比例配置洗涤溶液，然后洗涤步骤(4)制得的产物3次，以除去未反应的原料；

(6)在黑暗环境中，使用截留分子量为800的透析管在蒸馏水中透析步骤(5)制得的产物3天；

(7)使用冷冻干燥机在-60℃下真空冷冻干燥步骤(6)制得的产物，形成聚槲皮素冻干粉，并储存在4℃且无光的地方。

2.根据权利要求1所述的一种聚槲皮素滴眼液，其特征在于各成分及其含量为：在每10ml磷酸盐缓冲溶液中，加入的聚槲皮素冻干粉的含量为77.2ug；滴眼液中的聚槲皮素在1.93μg/ml时开始抑制烟曲霉菌。