[发明专利]从犬粪中分离细粒棘球绦虫虫卵及体外孵化出六钩蚴的方法

权利要求书

1.制备细粒棘球绦虫六钩蚴的方法，包括：从细粒棘球绦虫感染的粪便中分离细粒棘球绦虫虫卵，将所述细粒棘球绦虫虫卵使用胃蛋白酶进行孵化，使用脱壳液进行脱壳，使用Percoll培养液进行纯化得到细粒棘球绦虫六钩蚴；

所述Percoll培养液由溶质和溶剂组成，溶剂为Percoll，溶质为10×NCTC135液体培养基、谷氨酰胺和庆大霉素；所述Percoll培养液中，10×NCTC135液体培养基的体积百分含量为10％，谷氨酰胺的含量为2M谷氨酰胺，庆大霉素的质量含量为5％；

所述分离细粒棘球绦虫虫卵，包括如下步骤：

A1)取细粒棘球绦虫感染犬的粪便，用0.85％的NaCl溶液稀释所述粪便后过滤，收集滤过物，对所述滤过物进行离心，收集沉淀，使用0.85％的NaCl溶液重悬所述沉淀得到的液体为含细粒棘球绦虫虫卵的宿主粪样悬浮液；

A2)在饱和蔗糖溶液上层加入所述含细粒棘球绦虫虫卵的宿主粪样悬浮液，进行纯化虫卵处理，得到纯化后的细粒棘球绦虫虫卵。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：A2)中所述纯化虫卵处理包括如下步骤：在所述饱和蔗糖溶液上层加入所述含细粒棘球绦虫虫卵的宿主粪样悬浮液后，对所述饱和蔗糖溶液上层进行搅拌扩散处理；所述搅拌扩散处理为使用搅拌棒以80-90圈/分钟的速度匀速旋转搅拌60圈使液体分层，吸取上层液体，用0.85％的NaCl溶液稀释所述上层液体后，离心收集沉淀。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：A2)中，所述饱和蔗糖溶液和所述含细粒棘球绦虫虫卵的宿主粪样悬浮液的体积比为9:3。

4.分离细粒棘球绦虫虫卵的方法，其特征在于：所述方法包括从细粒棘球绦虫感染的粪便中分离细粒棘球绦虫虫卵，所述分离细粒棘球绦虫虫卵，包括如下步骤：

A1)取细粒棘球绦虫感染犬的粪便，用0.85％的NaCl溶液稀释所述粪便后过滤，收集滤过物，对所述滤过物进行离心，收集沉淀，使用0.85％的NaCl溶液重悬所述沉淀得到的液体为含细粒棘球绦虫虫卵的宿主粪样悬浮液；

A2)在饱和蔗糖溶液上层加入所述含细粒棘球绦虫虫卵的宿主粪样悬浮液，进行纯化虫卵处理，得到纯化后的细粒棘球绦虫虫卵。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：A2)中所述纯化虫卵处理包括如下步骤：在所述饱和蔗糖溶液上层加入所述含细粒棘球绦虫虫卵的宿主粪样悬浮液后，对所述饱和蔗糖溶液上层进行搅拌扩散处理；所述搅拌扩散处理为使用搅拌棒以80-90圈/分钟的速度匀速旋转搅拌60圈使液体分层，吸取上层液体，用0.85％的NaCl溶液稀释所述上层液体后，离心收集沉淀。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：A2)中，所述饱和蔗糖溶液和所述含细粒棘球绦虫虫卵的宿主粪样悬浮液的体积比为9:3。

7.权利要求1-6中任一权利要求所述的方法在构建原发感染包虫病模型中的应用。

8.权利要求4-6中任一权利要求所述的方法在分离活性寄生虫卵中的应用。