[发明专利]用于分离贴壁细胞的无酶解离液及其制备方法

说明书

本发明公开了用于分离贴壁细胞的无酶解离液及其制备方法，用于分离贴壁细胞的无酶解离液，包括以下浓度的组分：磷酸氢二钾100～200mg/L、氯化钾200～300mg/L、氯化钠7000～9000mg/L、七水磷酸氢二钠1500～2000mg/L、精氨酸17000～70000mg/L、天冬氨酸钠盐15000～50000mg/L和赖氨酸29000～140000mg/L。本技术方案提出的一种用于分离贴壁细胞的无酶解离液及其制备方法，将天冬氨酸钠盐、赖氨酸和精氨酸进行复配，有利于增强无酶解离液的解离能力，缩短解离时间，且解离后的细胞损伤小，残留物质安全无毒性，以克服现有技术中的不足之处。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种用于分离贴壁细胞的无酶解离液及其制备方法。

背景技术

细胞培养是指从体内组织取出细胞模拟体内生存环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定的营养条件下，使其生长繁殖并维持结构何功能的一种培养技术。从体内取出的细胞首次培养即为原代培养，这是细胞培养的最初和必经阶段。当原代培养细胞生长到一定时期，受到群体环境限制，就需要转移到另一个容器才能继续生长，这个过程称为传代或继代培养。

目前用于分离贴壁细胞的解离液及其分离方法仍然存在以下存点：对细胞的损伤比较大、毒性大,细胞存活细胞的存活率较低；解离后的贴壁细胞，进行多次细胞传代会影响细胞的活力；操作繁琐，不同操作者之间的实验结果的差异大。

发明内容

本发明的目的在于提出一种用于分离贴壁细胞的无酶解离液及其制备方法，将天冬氨酸钠盐、赖氨酸和精氨酸进行复配，有利于增强无酶解离液的解离能力，缩短解离时间，且解离后的细胞损伤小，残留物质安全无毒性，以克服现有技术中的不足之处。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

用于分离贴壁细胞的无酶解离液，包括以下浓度的组分：磷酸氢二钾100～200mg/L、氯化钾200～300mg/L、氯化钠7000～9000mg/L、七水磷酸氢二钠1500～2000mg/L、精氨酸17000～70000mg/L、天冬氨酸钠盐15000～50000mg/L和赖氨酸29000～140000mg/L。

优选的，包括以下浓度的组分：磷酸氢二钾150～200mg/L、氯化钾200～250mg/L、氯化钠8000～9000mg/L、七水磷酸氢二钠1500～1700mg/L、精氨酸26000～70000mg/L、天冬氨酸钠盐15000～25000mg/L和赖氨酸51000～73000mg/L。

优选的，包括以下浓度的组分：磷酸氢二钾200mg/L、氯化钾200mg/L、氯化钠9000mg/L、七水磷酸氢二钠1500mg/L、精氨酸70000mg/L、天冬氨酸钠盐50000mg/L和赖氨酸140000mg/L。

优选的，所述精氨酸的分子式为C₆H₁₄N₄O₂。

优选的，所述天冬氨酸钠盐的分子式为C₄H₆NNaO₄。

用于分离贴壁细胞的无酶解离液的制备方法，包括以下步骤：

(1)取磷酸氢二钾、氯化钾、氯化钠、七水磷酸氢二钠、精氨酸、天冬氨酸钠盐和赖氨酸，根据上述组分各自的溶解特性分类溶解后混合，得到混合料；

(2)在混合料中加入水，使各组分浓度满足权利要求1～5任意一项所述的用于分离贴壁细胞的无酶解离液，得到混合溶液；

(3)调节混合溶液的pH，得到用于分离贴壁细胞的无酶解离液。

优选的，步骤(2)中，所述水为超纯水。

优选的，步骤(3)中，所述用于分离贴壁细胞的无酶解离液的pH值为7.2～7.4。