[发明专利]基于血糖仪信号读出的多种毒品快速检测方法

权利要求书

1.基于血糖仪信号读出的多种毒品快速检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一：首先制备用于特异性毒品检测的96孔免疫基板，将甲基苯丙胺、吗啡、氯胺酮等标准品通过化学合成法与牛血清白蛋白偶联形成药品-BSA复合物，作为免疫原分别固定于96孔免疫基板孔底；

步骤二：体液样品中相应毒品成分将与96孔免疫基板内固定的免疫原共同竞争对应生物素化单克隆抗体上的抗原结合位点，使孔板捕获到生物素化抗体与样品中的毒品浓度负相关；

步骤三：经过冲洗后，继续向体系中加入链霉亲和素以及生物素化转化酶，加入底物后，转化酶可催化其分解为葡萄糖，检测结果即可以家用血糖仪读出。

2.根据权利要求1所述的基于血糖仪信号读出的多种毒品快速检测方法，其特征在于：所述步骤三中引入脂质体元素，其中脂质体内部容积较大，蔗糖转化酶分子被封装在水性空腔内，同时由于脂质体可携带大量酶分子并通过加入表面活性剂在可控条件下释放，在此过程中更多的转化酶以自由状态与底物作用生成葡萄糖，使信号有效放大。

3.根据权利要求2所述的基于血糖仪信号读出的多种毒品快速检测方法，其特征在于：所述毒品快速检测的操作步骤如下：

(1)毒品分子-牛血清白蛋白复合物的合成：先将20mg毒品化合物、15mg EDC及30mgBSA混合溶于1.0mL Tris缓冲液中，0-4℃下避光搅拌l h，再加入5.0mg EDC，室温条件下搅拌反应12h，静置过夜后，用Tris缓冲液透析除去未反应的小分子物质，得毒品分子与BSA的偶联物；

(2)96孔免疫基板的包被：将多孔板先经紫外线照射，紫外灯强度为30W，96孔板距离紫外线75cm处照射12h，以增加其吸附性能，同时将(1)所得毒品分子与BSA的偶联物以碳酸氢钠缓冲液溶解，其中碳酸氢钠缓冲液pH为9.6，配制成浓度为100ng mL^-1－20μg mL^-1的溶液，向96孔免疫基板每孔内加入体积为50μL包被液，在4℃冰箱中放置过夜，之后吸去包被液，以缓冲液轻柔冲洗孔板两次，以N₂吹干，得到复合物包被板；

(3)转化酶@Biotin-脂质体信标的合成：含有DHPE和1.0mg biotin-DHPE首先溶解于0.1mL氯仿中于1.5mL离心管中，其中biotin-DHPE摩尔比为19:1，自然蒸干形成脂质膜，将脂质膜溶解在含转化酶的磷酸盐缓冲液中，其中磷酸盐缓冲液的pH为7.4，形成脂质体，继续在45℃水浴中孵育20min，通过0.4μm聚碳酸酯膜以产生均匀尺寸的脂质体悬浮液，用300kDa的透析袋除去过量转化酶，4℃下搅拌48h；

(4)血糖仪检测标准曲线的获取：将空白及不同浓度的待测目标抗原与一定量抗体免疫，之后加入到96孔免疫基板的检测孔中，之后洗涤，并逐步加入链霉亲和素、生物素标记转化酶，之后加入蔗糖，稍后将反应液滴加到血糖检测试纸上，并插入血糖仪获取读数，以其读数对抗原浓度作图并进行回归分析，得到标准曲线。

4.根据权利要求3所述的基于血糖仪信号读出的多种毒品快速检测方法，其特征在于：所述操作步骤(1)毒品化合物中的氯胺酮与BSA以戊二醛交联法制备。

5.根据权利要求3所述的基于血糖仪信号读出的多种毒品快速检测方法，其特征在于：所述操作步骤(4)中用转化酶@biotin-脂质体、表面活性剂代替链霉亲和素、生物素标记转化酶。