[发明专利]一种烯酰吗啉半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种烯酰吗啉半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。所述烯酰吗啉半抗原的结构式如式I所示；再以此为基础制备烯酰吗啉人工抗原和抗体，并建立了一种基于抗体的检测烯酰吗啉的免疫分析方法，对烯酰吗啉的最低检测限为1.43ng/mL，IC₅₀为4.34ng/mL，线性范围为2.17～8.69ng/mL，表明本发明制备的人工抗原具有良好的免疫原性，可以用于后续制备烯酰吗啉多克隆抗体、单链抗体和纳米抗体并建立相对应免疫分析法，在烯酰吗啉检测中具有较大的应用前景。

技术领域

本发明涉及食品安全检测技术领域，更具体地，涉及一种烯酰吗啉半抗原、 人工抗原、抗体及其制备方法和应用。

背景技术

烯酰吗啉属于羧酸酰胺类杀菌剂，因其能引起孢子囊壁的分解，从而使菌体 死亡，被广泛应用于防治葡萄，土豆，辣椒等蔬菜的霜霉病，晚疫病，冠腐病和 根腐病等真菌性病害。然而烯酰吗啉使用后容易在环境中蓄积，例如地表和地下 水，废水，污泥，土壤。此外，烯酰吗啉会对DNA谱图进行修饰，从而造成不 良的遗传变化，对人类和其他生物均显示出明显的毒性。

由于烯酰吗啉的残留引起的环境及健康问题，我国2019年颁布的GB 2763—2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》明确规定了烯酰吗啉 在蔬菜、水果及干制水果中最大残留量为0.01g/kg～30mg/kg，在饮料类及调味 料中最大残留量为5.0mg/kg～80mg/kg。近十几年来，食品农药残留物在世界 范围内引起人们的关注，关于烯酰吗啉超标的事件也时有发生，加强农产品中烯 酰吗啉检测亟不可待。现有常见的检测烯酰吗啉的方法有：主要有高效液相色谱 法，荧光光谱法，气相色谱法，紫外光谱法，液相色谱串联质谱法等仪器分析方 法，但是仪器分析法由于其样本前处理及测定过程繁琐，费用高、需要专业人员 操作，不适于大量样本筛查。因此建立快速、便捷的烯酰吗啉残留检测方法显得 十分重要。基于抗原-抗体特异性结合的免疫分析法，具有样本前处理简便、操 作简单、快速、灵敏和高通量等特点，被誉为是21世纪最具有竞争和挑战的快 速检测技术，在食品安全领域具有广阔的应用前景。但是，对于免疫分析法而言， 抗体作为核心原材料，抗体的效果很大程度是取决于引起相应动物发生免疫反应 的抗原结构。例如中国专利CN110845444A、CN111138381A均公开有烯酰吗啉 半抗原，但是依然有限，因此，提供更多抗原结构稳定，可制备出对高特异性抗 体，能够快速、灵敏、准确的检测烯酰吗啉的半抗原具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一种烯酰吗 啉半抗原。

本发明另一目的是提供一种烯酰吗啉人工抗原。

本发明的再一目的是提供一种抗烯酰吗啉抗体。

本发明的再一目的是提供所述烯酰吗啉半抗原、人工抗原及制备的抗体在免 疫检测烯酰吗啉含量中的应用。

本发明的上述目是通过以下技术方案给予实现：

本发明提供了一种烯酰吗啉半抗原，其结构式如式I所示：

本发明对烯酰吗啉分子进行改造，在苯环甲氧基的邻位上，通过甲酰化反应 引入醛基，然后再经羧甲基羟胺肟化得到半抗原，该半抗原未改变烯酰吗啉骨架 结构和原有侧链，与烯酰吗啉结构高度一致，有利于高特异性抗体的诱导。

本发明还提供所述烯酰吗啉半抗原的制备方法，先将烯酰吗啉与三氯氧磷和 DMF发生反应制备出甲酰化烯酰吗啉中间体；再将中间体与羧甲基羟胺半盐酸 盐在吡啶/甲醇存在的条件下发生反应，即制得式I所示烯酰吗啉半抗原。其反应 式如下所示：

作为一种优选地可实施方式，所述烯酰吗啉半抗原的制备方法，包括如下步 骤：