[发明专利]一种预防和治疗人乳头瘤病毒感染的生物活性蛋白、其制备方法及其应用

说明书

本发明提供了一种预防和治疗人乳头瘤病毒感染的生物活性蛋白、其制备方法及其应用。所述的生物活性蛋白为酸酐化乳铁蛋白、酸酐化乳清蛋白或酸酐化组蛋白，所述的酸酐化是采用4‑羟基苯酐、4‑羟基苯酐的衍生物、琥珀酸酐或马来酸酐对蛋白进行修饰而得。本发明的生物活性蛋白具有阻断HPV病毒入侵细胞、阻止病毒扩大感染、抗菌、抗氧化、安全、稳定、便于保存和运输、成本低等优点。

技术领域

本发明涉及一种预防和治疗人乳头瘤病毒感染的生物活性蛋白、其制备方法及其应用，属于医药技术领域。

背景技术

人乳头瘤病毒(Human papilloma viruses,HPV)是少数几种明确与人类癌症相关的病毒之一,其持续感染是导致宫颈癌发生的重要危险因素。据统计，在所有宫颈癌的患者中，超过99％的病例可被检测到高危型HPV DNA。大约50％以上性生活活跃的女性一生中都曾有过HPV感染，持续性高危型HPV感染者患宫颈癌的风险增加100-300倍。因此，及早干预和清除HPV感染对于宫颈病变CIN的预防非常重要。目前针对HPV感染的治疗较多，其中局部用药为常用方法之一，药物种类繁多，但临床治愈率均不理想。

目前已有商品化的二价(HPV-16、18型)或四价HPV疫苗(HPV-6、11、16和18型)，可用于预防同型别病毒感染。但疫苗价格过高，特定疫苗对其他型HPV的疫苗无交叉免疫。目前上市销售预防和治疗人乳头瘤病毒感染的药物和生物制剂较少，仍需开发新的药物和生物制剂。

中国专利201510537630.7提供了一种电荷修饰的乳铁蛋白与卡拉胶组合药物及其制备方法，此发明公开了一种电荷修饰的乳铁蛋白与卡拉胶组合药物，包括0.01重量份的LK蛋白、1.5重量份的卡拉胶、5重量份的卡波姆、50重量份的甘油、0.1重量份的尼泊金乙酯。该组合药物为凝胶剂、栓剂、敷料中一种。该专利中所用的LK蛋白是通过3-羟基-邻苯二甲酸酐对乳铁蛋白进行修饰，由于3-羟基-邻苯二甲酸酐空间位阻大，活性较低，对乳铁蛋白的修饰效果不佳，影响抗HPV病毒的效果。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种预防和治疗人乳头瘤病毒感染的生物活性蛋白、其制备方法及其应用。

本发明的技术思路如下：酸酐化乳铁蛋白来源于牛奶蛋白，经过酸酐化修饰后得到的乳铁蛋白表面带有更多的负电荷，与HPV衣壳蛋白的L1区的C端L2区的N端的正电荷区域相结合，阻断病毒侵入宿主细胞内的过程，从而达到阻断HPV感染的目的。发明人通过大量研究工作，意外发现了一种对乳铁蛋白的修饰效果更佳的酸酐，得到的酸酐化乳铁蛋白具有更好的抗HPV病毒的效果。

本发明的技术方案如下：

一种用于预防和治疗人乳头瘤病毒感染的生物活性蛋白，所述的生物活性蛋白为酸酐化乳铁蛋白、酸酐化乳清蛋白或酸酐化组蛋白，所述的酸酐化是采用4-羟基苯酐、4-羟基苯酐的衍生物、琥珀酸酐或马来酸酐对蛋白进行修饰而得。

优选地，

本发明中，用于预防和治疗人乳头瘤病毒感染的生物活性蛋白，为4-羟基苯酐修饰的乳铁蛋白。

本发明中，所述的4-羟基苯酐修饰的乳铁蛋白为酸酐化乳铁蛋白冻干粉，所述的酸酐化乳铁蛋白冻干粉的制备方法如下：在温度为25-50℃的条件下，将4-羟基苯酐溶于二甲基亚砜中，得到饱和的4-羟基苯酐溶液；将乳铁蛋白溶于0.1M磷酸三钠溶液中，得到终浓度为30-80mg/mL的蛋白溶液；将上述4-羟基苯酐溶液加入蛋白溶液中，搅拌混匀，4-羟基苯酐在反应体系中的终浓度为30-80mM，静置反应2小时；得到酸酐化乳铁蛋白；用0.45uM滤膜抽滤除菌后使用pH 7.2磷酸盐缓冲液进行超滤置换纯化(所用超滤膜截留分子量为10KD)或离子交换纯化；再用0.45uM微孔滤膜抽滤除菌，加入保护剂使用冷冻干燥机进行冷冻干燥，收集冻干粉，即得酸酐化乳铁蛋白冻干粉。