[发明专利]一种靶向药物的高通量筛选方法

说明书

本发明公开了一种靶向药物的高通量筛选技术，将金属纳米粒子探针或磁珠探针分别与拉曼信号分子、靶蛋白或靶蛋白结合受体蛋白偶联，并同时加入待筛选化合物中，孵育，最后，检测拉曼信号，判断所述待筛选化合物是否为靶向抑制剂，所述靶向抑制剂具有抑制靶蛋白相关生物学活性的特点。本发明首次将拉曼信号检测应用到靶向新药筛选技术领域，并结合金属纳米粒子及磁珠，形成简单灵敏的新药筛选方法。同时，该方法测量干扰小，所需样品量少，信号强且灵敏度高，同时操作简便，整个检测过程无需进行清洗，为靶向药物筛选途径提供了新策略。

技术领域

本发明属于药物筛选技术领域，具体涉及一种靶向药物的高通量筛选方法。

背景技术

高通量药物筛选是指以分子水平和细胞水平的实验方法为基础，以微板等形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行实验过程，以灵敏快速的检测仪器采集实验结果数据，以计算机对实验数据进行分析处理，同一时间对大量样品进行检测，并以相应的数据库支持整个体系运转的技术体系。随着越来越多新靶点的出现、合成化学的发展以及新检测技术的应用，也出现了许多高通量药物筛选手段，如差式扫描荧光法(differentialscanning fluorimetry)，表面等离子共振法(surface plasmon resonance)，生物膜干涉法(bio-layer interferometry)，放大化学发光亲和均相检测(Alpha Screen)及荧光偏正法(fluorescence polarization)等。

在基于靶点的药物筛选中，放大化学发光亲和均相检测(Amplified LuminescentProximity Homogeneous Assay Screen，ALPHA Screen)技术，由于其灵敏、实时、快速、方便等众多优点，是高通量筛选的常用手段之一。该技术是基于微珠的均相亲和检测方法。但是，ALPHA技术所得结果可能与胞内真实状况不同，很难直接关注蛋白质的相互作用过程。而且，由于其串联式的放大信号反应，产生了高度灵敏的信号，只要在200nm范围内存在受体微珠(Acceptor beads)，就可以在520-620nm产生光信号，所以容易出现因微珠发生异常靠近而产生的假阳性信号。

表面等离子共振法(surface plasmon resonance)在金属表面固定一层受体分子(receptor),加在缓冲液中的配体(ligand)与固定的受体的反应将导致谱峰发生可以观测到的位移。通过分析共振角的改变，就可以得到分子间相互作用的信息。这些信息数据传输到计算机上，通过分析可以实时、定量、灵敏地监测到生物大分子的相互作用。但该方法需要使用专用的芯片，检测成本较高，与细胞实验和动物药效学实验结果有时会存在差异。

表面增强拉曼光谱分析技术：光的散射是指光通过不均匀介质时一部分光偏离原方向传播的现象，偏离原方向的光称为散射光。拉曼散射则是波长发生改变的散射光，即入射光与介质的分子运动相互作用引起的频率发生改变的散射。每种物质都有自己特有的拉曼光谱，拉曼峰的位置和强度、拉曼谱线的数目直接与样品分子振动或转动能级有关。因此，与红外吸收光谱类似，解析拉曼光谱也可以得到有关分子振动或转动的信息进而用于物质定性、定量分析。但是拉曼散射是个非常弱的过程，散射光强仅约为入射光强的10^-10，得到的拉曼信号强度较低，故限制了拉曼散射的应用和发展。

直到二十世纪七十年代科研工作者发现当一些分子被吸附到某些粗糙的金属(如银、铜、金等)表面上时，它们的拉曼散射强度会增加10⁴～10⁶倍，这一现象被称为表面增强拉曼散射(Surface-Enhanced Raman Spectroscopy，SERS)，这一技术解决了拉曼光谱信号强度低的问题，使超灵敏分析成为可能。但是，目前为止，并未有拉曼信号检测技术应用于小分子抑制剂的药物筛选中。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种抑制剂的高通量筛选和捕获方法，所述方法具有信号灵敏，并且极近距离触发，可以排除大部分因微珠发生异常靠近而产生的假阳性信号等优势。