[发明专利]一种融合蛋白、含其的疫苗及其应用

说明书

本发明公开了一种融合蛋白、含其的疫苗及其应用，所述融合蛋白从N端到C端依次包含：流感病毒的核蛋白NP片段、基质蛋白M2e和血凝素颈部保守区HA2片段，其中所述NP片段的序列为NP₁(335‑350aa)和NP₂(380‑393aa)；所述M2e包括甲1型M2e的至少两个相同拷贝；所述HA2片段包括H1、H3和H7三种亚型的颈部保守序列(76‑130aa)。本发明所提供的融合蛋白对流感病毒的识别度广，能够识别与本身所包含序列的亚型不同的病毒，可针对高变异流感病毒获得广谱的免疫保护效果。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种融合蛋白、含其的疫苗及其应用。

背景技术

流感是由流感病毒引起的严重危害人类健康的急性呼吸道传染病。流感病毒依据病原的不同，可分为甲、乙、丙3型。乙型和丙型流感病毒变异相对较少，从未引起世界大流行，而其中甲型流感病毒亚型多，变异大，已成为流感防控和疫苗研究的重点。预防流感大流行最有效的措施是疫苗接种，然而，依据目前甲型流感疫苗研发策略和技术路线生产的疫苗生产周期长、成本高、有滞后性，很难适应防控流感大流行的需求。若能研制出甲型流感病毒不同亚型间具有交叉保护作用的疫苗，即广谱流感疫苗，将改变目前全世界防控流感大流行的被动局面。

近年来，流感病毒广谱中和抗体的发现、对流感病毒抗原保守区域及细胞免疫机制的深入研究、疫苗免疫策略的优化等都为广谱流感疫苗的研发提供了新思路。研究表明NP(nucleoprotein，NP)蛋白非常保守，同型流感病毒NP蛋白的氨基酸相似性在90％上，在维持病毒RNA的结构和在流感病毒复制周期的过程中具有重要作用，控制着流感病毒的RNP(ribonucleoprotein)进入细胞核、RNA的复制及出核的各个关键环节。同时NP蛋白是CTL反应的主要靶点，其保护效果可通过Th细胞分泌的细胞因子介导，由Tc细跑的杀伤反应来实现，由于其保守性，在甲型流感病毒的不同亚型间具有交叉反应活性。甲型流感病毒M2(matrix，M)作为一种膜蛋白，具有离子通道活性，与膜内pH值的调节密切相关。M2蛋白的胞外区包含23个高度保守的氨基酸残基(M2 ectodomain，M2e)，虽然抗M2e抗体没有中和病毒的作用，但研究表明M2e主要是通过ADCC发挥作用，M2e特异性CD4⁺T细胞免疫反应也可能参与免疫保护，其单克隆抗体在体外与体内试验中均能抑制病毒的复制。在自然感染过程中虽然M2e蛋白免疫反应比较弱，不起主要作用，若能使用疫苗技术使机体获得针对M2e蛋白的强免疫反应，则有可能发展成为具有交叉保护能力的广谱流感疫苗。流感病毒的HA(haemagglutinin，HA)是流感病毒包膜上的跨膜糖蛋白三聚体，有16种亚型，具有亚型和株的特异性。HA包括头部和颈部，其中头部由HA1结构域组成，介导HA与细胞表面唾液酸受体结合；颈部介导病毒与细胞膜融合，由HA2和小部分HA1结构域构成，是相对保守区域。HA2融合区域广谱中和表位的发现为使用HA2保守区域研发可以对抗多种亚型甲型流感病毒的广谱流感疫苗提供了实验依据。

超抗原(Superantigen,SAg)，为一类能够超强活化刺激T细胞增殖的抗原，可高效激活生物的免疫细胞，产生免疫应答效应。其中金黄色葡萄球菌肠毒素(Stapholoccalenterotoxin,SEs)是一类由金黄色葡萄球菌和链球菌分泌的胞外蛋白质，属于典型的超抗原。其中SEC2亚型可在极低浓度下有效的激活机体的免疫系统，包括细胞免疫和体液免疫，可作为一种免疫激活剂应用于一些疾病的临床治疗研究。

但目前现有技术中，针对流感病毒的疫苗还须根据新的流行毒株及时更换生产毒株以保证疫苗效果，而且由于灭活疫苗生产依赖于鸡胚，生产周期长，生产能力低，成本高，难以适应防控流感大流行的需求；目前在研的亚单位广谱流感疫苗仅以病毒株的某个或少数几个保守区作为免疫靶点，导致其保护性不够广泛，免疫原弱。因此急需一种易于制备、成本低且识别广、有效度高的光谱流感疫苗。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为克服现有技术中所生产的季节性流感疫苗保护性不够广泛、免疫原弱且生产成本高的缺陷，提供一种融合蛋白、含其的疫苗及其应用。